離子交換色譜洗脫液的作用
和樹脂的親和力有關,主要是靜電吸引,其次是疏水作用。
樹脂的交聯度,即樹內脂基體容聚合時所用二乙烯苯的百分數,對樹脂的性質有很大影響。通常,交聯度高的樹脂聚合得比較緊密,堅牢而耐用,密度較高,內部空隙較少,對離子的選擇性較強。
而交聯度低的樹脂孔隙較大,脫色能力較強,反應速度較快,但在工作時的膨脹性較大,機械強度稍低,比較脆而易碎。
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大孔樹脂內部的孔隙又多又大,表面積很大,活性中心多,離子擴散速度快,離子交換速度也快很多,約比凝膠型樹脂快約十倍。使用時的作用快、效率高,所需處理時間縮短。
大孔樹脂還有多種優點耐溶脹,不易碎裂,耐氧化,耐磨損,耐熱及耐溫度變化,以及對有機大分子物質較易吸附和交換,因而抗污染力強,並較容易再生。
交聯度高的樹脂對離子的選擇性較強,大孔結構樹脂的選擇性小於凝膠型樹脂。這種選擇性在稀溶液中較大,在濃溶液中較小。
2. 離子色譜中淋洗液的作用是什麼
離子色譜分離是基於淋洗離子和樣品離子之間對樹脂有效交換容量的競爭,為了得到有效的競爭,樣品離子和淋洗離子應有相近的親合力。下面舉例說明選擇淋洗液的一般原則。用CO2-32HCO-作淋洗液時,在Cl-之前洗脫的離子是弱保留離子,包括一價無機陰離子、短碳鏈一元羧酸和一些弱離解的組分,如F-,甲酸,AsO-2,CN-和S2-等。對乙酸,甲酸與F-、Cl-等的分離應選用較弱的淋洗離子,常用的弱淋洗離子有HCO-3,OH-和B4O2-7。由於HCO-3和OH-易吸收空氣中CO2,CO2在鹼性溶液中會轉變成CO2-3,CO2-3之淋洗強度較HCO-3和OH-大,因而不利於上述弱保留離子的分離。B4O2-7亦為弱淋洗離子,但溶液穩定,是分離弱保留離子的推薦淋洗液。中等強度的碳酸鹽淋洗液對高親和力組分的洗脫效率低。
對離子交換樹脂親合力強的離子有兩種情況,一種是離子的電荷數大,如PO3-4,AsO3-4和多聚磷酸鹽等;一種是離子半徑較大,疏水性強,如I-,SCN-,S2O2-3,苯甲酸和檸檬酸等。對前者以增加淋洗液的濃度或選擇強的淋洗離子為主。對後一種情況,推薦的方法是在淋洗液中加入有機改進劑(如甲醇、乙腈和對氰酚等)或選用親水性的柱子,有機改進劑的作用主要是減少樣品離子與離子交換樹脂之間的非離子交換作用,占據樹脂的疏水性位置,減少疏水性離子在樹脂上的吸附,從而縮短保留時間,減少峰的拖尾,並增加測定靈敏度。
在離子色譜中,可由加入不同的淋洗液添加劑來改善選擇性,這種淋洗液添加劑隻影響樹脂和所測離子之間的相互作用,而不影響離子交換。對與樹脂親合力較強的離子,如一些可極化的離子,I-和ClO4-,以及疏水性的離子,苯甲酸和三乙胺等,在淋洗液中加入適量極性的有機溶劑如甲醇或乙腈,可縮短這些組分的保留時間並改善峰形的不對稱性。為了減少樣品離子與樹脂之間的非離子交換作用,減少樹脂對疏水性離子的吸附,在陰離子分析中,可在淋洗液中加入對氰酚。如測定1%NaCl中的痕量I-和SCN-時,加入對氰酚占據樹脂對I-和SCN-的吸附位置,從而減少峰的拖尾並增加測定靈敏度。IC中,一價淋洗離子洗脫一價待測離子,二價淋洗離子洗脫二價待測離子,淋洗液濃度的改變對二價和多價待測離子保留時間的影響大於一價待測離子。若多價離子的保留時間太長,增加淋洗液的濃度是較好的方法。
3. 離子交換色譜的低級問題
會交換一部分,但因為存在競爭的關系,而且也與濃度有關。所以色譜柱會有再生的過程。詳細的建議你去「色譜世界」網站看看,這個網站在色譜方面非常專業,對你會有較大的幫助的。
4. 離子交換色譜和疏水性相互作用色譜的洗脫原理有何異同
離子交換色譜抄法是利用離襲子交換原理和液相色譜技術的結合來測定溶液中陽離子和陰離子的一種分離分析方法。凡在溶液中能夠電離的物質通常都可以用離子交換色譜法進行分離。現在它不僅適用於無機離子混合物的分離,亦可用於有機物的分離,例如氨基酸、核酸、蛋白質等生物大分子,因此應用范圍較廣。
5. 凝膠色譜柱中的洗脫液主要成分是什麼有什麼作用。
水溶性的基本是水,油溶性的基本是四氫呋喃,乙酸乙酯等
6. 離子交換層析與疏水層析有何區別
離子交來換層析是利用蛋白自質在不同PH帶不同種電荷的方法,利用離子交換的方法分離蛋白的。離子交換內的介質一般是樹脂,陽離子交換型的,使用前樹脂先用鹼處理成鈉型,將氨基酸混合液(pH=2-3)上柱,pH=2-3時,氨基酸主要以陽離子形式存在,與樹脂上的鈉離子發生交換而被「掛」在樹脂上,再用洗脫劑洗脫。不同的氨基酸(帶的電荷不同)與樹脂的親和力不同,要將其分離洗脫下來,需要降低它們之間的親和力,方法是逐步提高洗脫劑的pH和鹽濃度,這樣各種氨基酸將以不同的速度被洗脫下來,反之亦然。不同反荷離子與樹脂親和力是不同的,其強弱關系為陽性競爭離子:Ag+〉CS+〉K+〉NH4+〉Na+〉H+〉Li+陰性競爭離子:I->NO3->(PO4)3->CN-〉HSO3-〉Mg2+〉HCO3-〉HCOO-〉CH3COO-〉OH-〉F-如果某種離子溶液洗脫效果不好,可用另一種親和力強的離子代替之,等電點>7選擇陽離子交換樹脂,等電點<7選擇陰離子交換樹脂。
7. 過離子交換柱時,pH梯度洗脫緩沖液一般用什麼緩沖液
如果不限定純化方法,可以考慮親和層析或離子交換,但根據你問題的意思版,是選定離子權交換。
此時就要考慮你蛋白的等電點了,如果等電點在你穩定pH之上,就用陽離子交換柱:
設計陽離子交換層析:將你的樣品置換到你所指的穩定pH的running
buffer。同時裝柱,平衡,然後上樣,平衡,洗脫(因為你的pH不穩定,建議鹽洗脫),收峰。得你的蛋白;
如果你的等電點在穩定pH之下,就用陰離子交換柱,其步驟如上,只是改變柱子類型。
8. 離子交換層析中,為什麼用氯離子洗脫陰離子
離子交換層析來中,為什麼用氯源離子洗脫陰離子
陰離子交換柱的填料是正電填料,在低鹽條件下可以通過電荷相互作用吸附樣品中的陰離子和負電荷物質(如DNA).這些帶負電的物質由於其帶電量不同,分子大小不同,因而與正電填料之間的結合力也就不同.用梯度的氯離子(一般用氯化鈉梯度,例如從100mM氯化鈉線性梯度升高到1M氯化鈉)洗脫掛柱樣品時,氯離子會和結合上的物質競爭結合正電填料,伴隨著氯離子濃度的不斷升高,氯離子的競爭作用越來越強,與填料結合的物質會按照親和力從弱到強依次洗脫下來,形成獨立的洗脫峰,從而將這些物質分開.
陽離子交換柱與之正好相反,柱子填料為負電荷,用鈉離子洗脫結合的正電物質.