組氨酸離子交換層析
Ⅰ 層析為幾大類各自的特點和用途是什麼
層析技術的分類
(1) 按流動相的狀態分類:用液體作為流動相的稱為液相層析,或稱液相色譜;以氣體作為流動相的稱為氣相層析,或稱氣相色譜。
(2) 按固定相的使用形式分類:可分為柱層析(固定相填裝在玻璃或不銹鋼管中構成層析柱) 、紙層析、薄層層析、薄膜層析等。
(3) 按分離過程所主要依據的物理化學原理分類:可分為吸附層析、分配層析、離子交換層析、分子排阻層析、親和層析等。
Ⅱ 離子交換層析分離氨基酸時,(苯乙烯磺酸鈉)為什麼組氨酸後洗脫出來而賴氨酸先洗脫出來
你們是不是這樣分析的:組氨酸的PI是7.59,賴氨酸是9.74,這證明賴氨酸鹼性更強,酸性更弱,而內用H+洗脫時,先洗脫是應容該是酸性弱的物質所以賴氨酸應該先洗脫下來?
或許可以這樣解釋:鹼性氨基酸和陽離子交換樹脂的結合是以氫離子為媒介,藉助氫鍵的極性連接起來的。如果我沒記錯的話,伯氨基形成的氫鍵要比仲氨基形成的氫鍵強一些。
不管用是鈉型的還是氫型的陽離子交換樹脂,組氨酸和賴氨酸要與其吸附都必需通過氫離子。鈉型的陽離子交換樹脂並是不所有的磺酸基都與鈉離子結合的。你用平衡常數算一下。而且,你用來溶解氨基酸的溶液是強鹼性的嗎?你的樹脂是再生的嗎?
Ⅲ 誰有2010生物聯賽遺傳解析。。。跪求
2010全國中學生生物學聯賽試卷及答案
注意事項:
1.使用28鉛筆在機讀卡上做答;
2.試題按學科分類,單選與多選混排,每小題只標明分值,分值不代表是否為多選,是否多選可從題干中判斷。答案完全正確才可得分:
3.答題時間120分鍾,全卷共l20道題l60分。
第一部分29道題(40分)
1.在細胞質膜的組成中,膽固醇分子 (1分)
A.僅存在於高等動物細胞中 B.儀存在於高等植物細胞中
C.高等動植物細胞中都存在 D.還未確定
2.細胞質膜上具備的鈉鉀泵每消耗一一個ATP分子將會 (1分)
A.向細胞內轉入2個K+向細胞外轉出2個Na+
B.向細胞內轉入2個Na+向細胞外轉出2個K+
C.向細胞內轉入3個K+向細胞外轉出2個Na+
D.向細胞內轉入2個K+向細胞外轉出3個Na+
3.構成溶酶體的各種酶完成合成最終是在那一個部位 (1分)
A.在游離核糖體上
B.在粗面內質網的核糖體上
C.同時在游離和粗面內質網核糖體上
D.在這兩種核糖體上輪流進行
【在粗面內質網上合成的蛋白是屬於外排蛋白,細胞質基質內游離核糖體合成胞內蛋白。但溶酶體它是由高爾基囊的邊緣膨大而出來的泡狀結構,因此它本質上是分泌泡的一種,其中含有多種水解酶。這些酶是在租面內質網的核糖體上合成並轉運到高爾基囊的。】
4.下列分子中不能通過無蛋白脂雙層膜的是哪一項 (1分)
A.二氧化碳 B.乙醇 C.尿素 D.葡萄糖
[記憶性內容,注意水也不能直接通過,人家有水通道蛋白]
5.以下哪種組蛋白不屬於核小體的核心蛋白 (1分)
A.Hl B.H2A C.H2B D.I-13 E.H4
[核小體是染色體的基本結構單位,由DNA和組蛋白(histone)構成,是染色質(染色體)的基本結構單位。由4種組蛋白H2A、H2B、H3和H4, 每一種組蛋白各二個分子,形成一個組蛋白八聚體,約200 bp的DNA分子盤繞在組蛋白八聚體構成的核心結構外面,形成了一個核小體。這時染色質的壓縮包裝 比(packing ratio)為6左右,即DNA由伸展狀態壓縮了近6倍。200 bpDNA為平均長度;不同組織、不同類型的細胞,以及同一細胞里染色體的不同區段中,盤繞在組蛋白八聚體核心外面的DNA長度是不同的。如真菌的可以短到只有154 bp,而海膽精子的可以長達260bp,但一般的變動范圍在180bp到200bp之間。在這 200bp中,146 bp是直接盤繞在組蛋白八聚體核心外面,這些DNA不易被核酸酶消化,其餘的DNA是用於連接下一個核小體。連接相鄰2個核小體的DNA分子上結合了另一種組蛋白H1。組蛋白H1包含了一組密切相關的蛋白質,其數量相當於核心組蛋白的一半,所以很容易從染色質中抽提出來。所有的H1被除去後 也不會影響到核小體的結構,這表明H1是位於蛋白質核心之外的。]
6.下列哪些細胞器具有質子泵 (2分)
A.內質網 8.高爾基體C.溶酶體 D.線粒體 E.葉綠體
【質子泵的驅動依賴於ATP水解釋放的能量,質子泵在泵出氫離子時造成膜兩側的pH梯度和電位梯度。溶酶體是要在酸性條件下起作用的,要是溶酶體酶泄漏到細胞質中的話會失效的,所以需要把H離子泵入溶酶體中。線粒體和葉綠體就不用說了吧】
7.線粒體在合成ATP過程中需要下列哪些條件 (2分)
A.基質中含有0: B.基質中含ADP
C.基質中的H+濃度大於膜間隙D.基質中的H+濃度小於膜間隙
8.在細胞減數分裂過程中會出現下列哪些現象 (2分)
A.同源染色體配對 B.DNA復制
C.同源染色體間交換 D.基因發生變異
9.電子顯微鏡下的細胞質膜體現出「暗一亮一暗」的結構,一般認為主要原因有哪些:(2 分)
A.磷脂分子的親水頭易被染色 B.外在膜蛋白的存在
C.胞外基質和膜下細胞骨架的存在 D.跨膜蛋白的存在
【三明治結構,暗的是蛋白質,明的是脂質。那個三明治結構,厚約7.5nm.這就是所謂的"單位膜"模型.它由厚約3.5nm的雙層脂分子和內外表面各厚約2nm的蛋白質構成。
10.下面關於組蛋白的說法哪些是正確的:(3分)
A.組蛋白普遍存在於真核細胞;
B.組蛋白在物種間很保守,進化緩慢;
C.組蛋白富含組氨酸;
D.組蛋白呈現鹼性;
E.組蛋白的修飾會影響基因的表達。
【原核細胞及線粒體葉綠體的DNA是裸露的,真核才和組蛋白結合,才叫染色質(體)。進化保守。組蛋白含精氨酸和賴氨酸,那倆都是鹼性氨基酸,所以組蛋白呈鹼性。記住阿,它叫組蛋白,但不含組氨酸。組蛋白乙醯化就是組蛋白的修飾,影響基因表達(DNA甲基化也行)。】
11.人體內嘌呤核苷酸分解代謝的主要終產物是以下哪一種? (1分)
A.尿素; 8.尿酸; C.丙氨酸;D.肌酸;E.肌酸酐
【嘌呤核苷酸的分解代謝,主要發生在肝、小腸及腎,代謝終產物是尿酸。黃嘌呤氧化酶是分解代謝中重要的酶。嘌呤代謝異常導致尿酸過多引起痛風症,臨床上常用別嘌呤醇治療痛風症。多說一句,嘧啶核苷酸的分解代謝:胞嘧啶脫氨基轉變成尿嘧啶,尿嘧啶最終生成NH3、CO2及β-丙氨酸。胸腺嘧啶降解成β-氨基異丁酸】
12.α—D一葡萄糖和β-D-葡萄糖的主要區別是下列哪一個? (1分A)
A.第l位碳原子上的羥基 B.第2位碳原子上的羥基
C.第5位碳原子上的羥基 D.第4位碳原子上的羥基
【這個題看圖吧】
13.按照脂肪酸的分類,油酸應該屬於哪一類脂肪酸? (1分)
A.軟脂肪酸 B花生四烯酸 C.硬脂肪酸 D.不飽和脂肪酸
油酸學名:十八碳-順-9-烯酸,18:1Δ9c。含18個碳原子和1個雙鍵的不飽和脂肪酸。熔點為13.4℃,是構成動、植物油脂的一種重要成分。】
14.在氨基酸的分類中,下面哪一個氨基酸屬於芳香族氨基酸?(1分)
A.丙氨酸 B.絲氨酸 C.色氨酸 D.亮氨酸
【酪氨酸(Tyrosine)、苯丙氨酸(Phenylalanine)、色氨酸(tryptophan),背下來吧。】
15.蛋白質的肽鍵是以下列哪一種方式形成的? (1分A)
A.α一氨基與α一羧基縮合而成 B.α一氨基與β一羧基縮合而成
C.β一氨基與α一羧基縮合而成 D.β一氨基與β一羧基縮合而成
【肽鍵就是氨基酸的α-羧基與相鄰的另一氨基酸的α-氨基脫水縮合的共價鍵,故肽鏈兩端有自由的α-氨基或α-羧基,分別稱為氨基末端或羧基末端。】
16.下列哪一個是DNA和RNA二者的主要區別? (1分)
A、(酯鍵),B、(核糖).C、(鹼基),D、(磷酸基)。
17.同工酶具有以下哪個特性?(1分)
A.具有相同的蛋白質分子結構 B.理化性質相同
C.催化相同的化學反應 D.免疫性能相同
【定義1:具有相同底物,但電泳遷移率不同的酶。可來源於多個基因座或等位基因的表達,也可能是基因翻譯後形成的。定義2:來源於同一種系、機體或細胞的同一種酶具有不同的形式。催化同一化學反應而化學組成不同的一組酶。產生同工酶的主要原因是在進化過程中基因發生變異,而其變異程度尚不足以成為一個新酶。全解釋了吧~ 】
18.使用離心機離心l00毫升樣品之前最重要的操作步驟是平衡,正確的操作是以下哪一個?(1分)
A.目測
B.用量筒量取同樣體積的樣品溶液分別倒入兩個離心管中
C.用托盤天平平衡兩個離心管,然後將樣品溶液分別倒入離心管
D.將樣品溶液分別倒入兩個離心管中,然後用托盤天平進行平衡
19.以下關於酶的描述,哪些是不正確的?(2分)
A大多數酶的化學本質是蛋白質
B.所有的酶都必須結合輔基或輔酶才能發揮催化作用;
C.都具有立體異構專一性
D.能顯著地改變化學反應速率
20.在生物大分子的分離純化過程中,能將生物大分子與無機鹽及有機小分子分離的方法
是以下哪些? (3分)
A.離子交換層析 B.凝膠過濾層析
C.濾紙過濾 D.透析 E.離心
【離子交換層析定義:固定相是離子交換劑的層析分離技術。樣品中待分離的溶質離子,與固定相上所結合的離子交換,不同的溶質離子與離子交換劑上離子化的基團的親和力和結合條件不同,洗脫液流過時,樣品中的離子按結合力的弱強先後洗脫。在生物化學和分子生物學領域此法常用於分離蛋白質、核酸等生物大分子。
凝膠過濾層析:使用有一定大小孔隙的凝膠作層析介質(如葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠、聚丙烯醯胺凝膠等),利用凝膠顆粒對分子量和形狀不同的物質進行分離的層析技術。由於各種分子的大小、形狀不同,擴散到凝膠孔隙內的速度不同,因而通過層析柱的快慢不同而分離。
濾紙過濾:這個是可溶性溶質與不可溶物質的分離
透析:穿過膜的選擇性擴散過程。可用於分離分子量大小不同的溶質,低於膜所截留閾值分子量的物質可擴散穿過膜,高於膜截留閾值分子量的物質則被保留在半透膜的另一側。
離心:利用物質的密度等方面的差異,用旋轉所產生背向旋轉軸方向的離心運動力使顆粒或溶質發生沉降而將其分離、濃縮、提純和鑒定的一種方法。物質的沉澱與離心力大小相關,而離心力取決於離心速度和旋轉半徑。一般按旋轉速度分低速離心、高速離心和超速離心。】
21.植物的微生物病害可引起植物機能失靈,代謝紊亂而導致植物生存能力下降,甚至死亡或極大地減少產量。哪種菌是較少引起植物致病的微生物?(1分)
A.細菌B.放線菌 C.黴菌 D.植物病毒
【放線菌一般是產抗生素的】
22.巴斯德採用曲頸瓶試驗來驗證下列哪種學說?(1分)
A.駁斥自然發生說 B.證明微生物致病
C.認識到微生物的化學結構 D.提出自然發生說
23.普通光學顯微鏡用油鏡觀察時鏡油應該加在哪個部位?(1分)
A.標本上 B.物鏡上 C.標本和物鏡之間 D.目鏡上
【光線通過不同密度的介質物體(玻片→空氣→透鏡)時,部分光線會發生折射而散失,進入鏡筒的光線少,視野較暗,物體觀察不清。如在透鏡與玻片之間滴加和玻璃折射率(n=1.52)相仿的香柏油(n=1.515),則使進入油鏡的光線增多,視野亮度增強,物象清晰。】
24.接種環的燒灼滅菌應該在何時進行?(1分)
A使用前 B.使用後 C使用前及使用後 D.儲存前
25.高壓蒸汽滅菌鍋的滅菌原理是以下哪一項?(1分)
A.高壓 B.高溫 C.高濕 D.高壓加高濕
【高壓蒸汽滅菌鍋利用的是高溫而不是高壓。】
26.微生物固體培養時通常用的器皿是哪一種?(1分)
A.三角瓶 B.試管 C.試劑瓶 D.培養皿
27.微生物固體培養時培養基中瓊脂的作用是哪一種?(1分)A
A.凝固劑 B.營養劑 C.生長調節劑 D.無機鹽
【固體培養基:在液體培養基中加入1%~2%瓊脂作凝固劑,
半固體培養基:在液體培養基中加入0.2%~0.5%的瓊脂製成的培養基】
28.以下哪些菌種可用於生產酸奶?(2分)
A.枯草芽孢桿菌 B.嗜熱鏈球菌C.保加利亞乳桿菌D.灰色鏈黴菌
【枯草芽孢桿菌:可利用蛋白質、多種糖及澱粉,分解色氨酸形成吲哚。有的菌株是α-澱粉酶和中性蛋白酶的重要生產菌;有的菌株具有強烈降解核苷酸的酶系,故常作選育核苷生產菌的親株或製取5'-核苷酸酶的菌種。在遺傳學研究中應用廣泛。
嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌活菌真正對人體起作用的是其乳發酵產物和底物。
由灰色鏈黴菌(Streptomycesgriseus)培養液提取而得的微生物蛋白酶,有極強的蛋白水解作用,可切斷蛋白質所含肽鍵的80%。能水解纖維蛋白、黏蛋白。在體內能與其抑制物結合,使酶活性中心受到保護,輸送至病變組織,又能同抑制物分離,恢復其酶活性。醫學上用於抗炎消腫。】
29.微生物產生的具有溫室效應的氣體有哪些? (2分)
A.C02 B.H2. C.CH4 D.N20
【目前大氣中主要的溫室氣體有六種:CO2、CH4、N2O、HFCs、PFCs、SF6。
CO2 二氧化碳:二氧化碳是主要的溫室氣體,其全球變暖影響比例因素為60%。現代大氣中CO2增加的原因主要是由於人類長期使用化石燃料(如,煤、石油、天然氣等)所造成的。微生物呼吸么么。
CH4 甲烷:甲烷是天然氣的主要成分。甲烷主要由厭氧微生物活動產生。又因為在沼澤地頗為常見(氣泡形式),所以甲烷俗名又稱沼氣。一個分子CH4產生的溫室效應強度約是一個CO2分子的7.5倍。絕大部分甲烷來源於人類的活動。
N2O 氧化亞氮:氧化亞氮是一種微量溫室氣體。因具有較長的大氣壽命,一般是150年,因此是一種高強度溫室氣體。N2O的主要源於陸地-土壤植被系統的釋放,以及化石燃料和生物質燃燒。農業中氮肥的使用也增加了N2O的大氣排放。】
第二部分41題(48分)
30.蕨類植物進行減數分裂後形成的第一個結構是(1分)
A. 孢子; B. 精子; C. 孢子體; D. 配子體
蕨類的孢子體也就是蕨類植物體,包括根、莖、葉、孢子囊群等結構,其孢子囊中的孢子母細胞經減數分裂即形成具有單套染色體的孢子,孢子成熟後,借風力或水力散布出去,遇到適宜的環境,即開始萌發生長,最後形成如小指甲大小的配子體,配子體上生有雄性生殖器官(精子器)和雌性生殖器官(頸卵器),精子器里的精子,藉助水游入頸卵器與其中的卵細胞結合,形成具有雙套染色體的受精卵,如此又進入孢子體世代,即受精卵發育成胚,由胚長成獨立生活的孢子體。】
31.2009年,中國頒發了具有自主知識產權的兩個轉基『犬l水稻品種的生產應用安全證書。
這兩個轉基因水稻均是哪一類: (1分)
A.轉抗蟲基因水稻 8.轉植酸酶基因水稻
C.轉谷氨酸合成酶基因水稻 D.轉生長素合成酶基因水稻
32.地錢是研究苔類植物的常用材料,目前已知其營養體的性別是由性染色體決定的,並且屬於XY型,那麼地錢雄性營養體的性染色體為(1分)
A.XX B.XY C. X D.Y E. YY
【地錢孢子體寄生在配子體上,孢蒴內孢子母細胞經過減數分裂發育成孢子(N).孢子借彈絲的力量散出,在適宜的環境中萌發成雌性或雄性的原絲體,進而發育成新的雌,雄配子體】
33.導管與管胞均是木質部中執行運輸功能的細胞,它們的主要差別在於哪一項:(1分)
A是否是死細胞;B 次生壁加厚方式;
C穿孔板的有無;D細胞的長寬比
【導管分子是一個死細胞。成熟時沒有生活的原生質,次生壁具有各種式樣的木質化增厚,端壁溶解消失形成穿孔。許多個導管分子以細胞的頂端對頂端連接起來就形成了導管。
導管和管胞 導管分子和管胞都是厚壁伸長的死細胞,但管胞是單個細胞,末端尖銳,端壁沒有穿孔,上下連接的管胞靠側壁上的紋孔傳遞水分。】
34.提取植物葉綠素時經常採用的試劑是:(1分)
A.乙醇 B. 甘油 C. 重蒸水 D. 丙酮
【高中學過的,提取植物葉綠素用的是乙醇和丙酮。
甘油:食品加工業中通常使用的甜味劑和化妝品中的保濕劑。
重蒸水:將經過一次蒸餾後的水,再次蒸餾所得到的水。一般用在比如冰凍蝕刻等要求高的實驗中】
35.植物組織培養中細胞分裂素與生長素比值低時誘導(1分)
A.芽的分化 B.根的分化 C.葉的分化 D.芽的休眠
【生長素用量比細胞分裂素用量,比值高時,有利於根的分化,抑制芽的形成:比值低時,有利於芽的分化,抑制根的形成.比值適中時,促進愈傷組織的生長.高中內容吧。】
36.促使植物葉表皮氣孔關閉的植物激素是(1分)
A.ABA B.CTK C.ETH D.GA3 E.IAA
【脫落酸:在缺水條件下,植物葉子中ABA的含量增多,引起氣孔關閉。這是由於ABA促使保衛細胞的K+外滲,細胞失水使氣孔關閉。用ABA水溶液噴施植物葉子,可使氣孔關閉,降低蒸騰速率。因此,ABA可作為抗蒸騰劑。】37.利用暗期間斷可以抑制短曰照植物開花,選擇下列哪種光最為有效(1分)
A.紅光 B.遠紅光 C.藍紫光 D.綠光 E.白光
【在可見光中,光照誘導成花或光間斷破壞誘導的效應,以660納米的紅光為最有效。這種作用可以被730納米的遠紅光解除,又可以被660納米的紅光恢復。這種相互逆轉可以反復多次。】
38.水稻莖的維管束屬於(1分)
A.雙韌維管束 B.周韌維管束
C.外韌無限維管束 D.外韌有限維管束
39.下列哪些屬於同源器官(2分)
A.玫瑰莖上的刺與仙人掌莖上的刺B.山楂樹的枝刺與馬鈴薯(土豆)
C.馬鈴薯(土豆)與甘薯(地瓜)D.甘薯(地瓜)與菟絲子的吸器
【玫瑰莖上的刺是皮刺,仙人掌的刺是葉的變態。山楂樹的枝刺與馬鈴薯(土豆)是莖的變態,甘薯(地瓜)是根的變態,菟絲子的吸器是由根變態而成的,種子萌發時幼芽無色,絲狀,附著在土粒上,另一端形成絲狀的菟絲,在空中旋轉,碰到寄主就纏繞其上,在接觸處形成吸根,進入寄主組織後,部分細胞組織分化為導管和篩管,與寄主的導管和篩管相連。】
40.被子植物的雌配子體是指(1分)
A.雌蕊 B. 胚珠 C.八核胚囊 D.子房
七個細胞八個核
41.下列說法中哪些是正確的(2分)
A.裸子植物具有頸卵器
B.雙受精是種子植物特有的現象;
C.被子植物成熟花粉粒有一個營養細胞和一個精細胞;
D.被子植物花的花萼、花瓣、雄蕊和雌蕊都是同源器官
【雙受精是被子植物特有的現象。被子植物成熟花粉粒有一個營養細胞和2個精細胞吧。被子植物花的花萼、花瓣、雄蕊和雌蕊都是同源器官,都是變態的葉】
42.被子植物的生活史中,配子體階段的第一個細胞是(1分)
A.合子 B.配子 C,孢子 D.種子
【被子植物配子體世代:由大、小孢子母細胞減數分裂,形成單核大小孢子開始,到含卵的成熟胚囊和含2或3細胞的成熟花粉粒,萌發花粉管,雙受精開始為止,是植物體的有性階段,稱有性世代。】
43.裸子植物的胚乳是(1分)
A.精卵受精後,由珠心細胞發育來的
B.精卵受精後,由雌配子體細胞發育來的
C.精卵受精後,由受精極核發育來的
D.精卵受精後,由頸卵器腹溝細胞發育來的
【精卵受精後,由雌配子體細胞發育來的,所以裸子植物的胚乳是N】
44.在對木雕文物進行修復過程中常需要對文物碎屑進行離析後顯微鏡觀察,判斷該文物是由什麼植物材料製作的,如果觀察到下列哪類細胞就可判斷其不可能是柏木製作的:(1分)
A.篩胞; 8.導管分子; C.纖維;D.管胞
【多數裸子植物莖的次生木質部主要由管胞,木薄壁組織和射線所組成,無導管,無典型木纖維。松屬植物一般缺少韌皮纖維,而紅豆杉科,柏科,杉科一般都有纖維。】
45.園藝師想從新移栽的一株松樹上收集種子,他發現這株松樹在2009年4月出現了雌球果,請問到什麼時間園藝師才可能從這些雌球果中收集到成熟種子?(1分)
A.2009年9月; 8. 2009年11月;
C.2010年1月;D. 2010年9月
松樹傳粉時的雌球花近直立狀。傳粉後,鱗片閉合,球果開始緩慢的發育。約在傳粉後13個月以後的春季或初夏發生受精,繼而球果開始迅速生長,一般在第 2年的夏末和秋季成熟後,著球果成熟。】
46.酵母菌產生的有性孢子是(1分)
A.芽孢子 B.卵孢子 C.分生孢子 D.子囊孢子
【酵母菌的出芽生殖出的芽可以叫芽生孢子,是一種無性孢子,因為單倍體和二倍體的酵母菌都能長期存在並無性繁殖,所以芽生孢子有單倍體也有二倍體;酵母菌進行有性生殖時,兩個單倍體細胞經過質配,核配,形成二倍體細胞,再減數分裂,產生子囊孢子,是一種有性孢子,和無性生殖產生的孢子有本質區別,子囊孢子一定是單倍體的,可以直接萌發成一個單倍體酵母菌】
47.蘆筍是一種很可口的蔬菜,通過蘆筍刀口切面可以看到一些分散排列的細胞團,這些細胞團是什麼?據此特徵判斷蘆筍是單子葉植物還是雙子葉植物。(1分)
A.石細胞雙子葉植物 B.維管束單子葉植物
C.纖維束雙子葉植物 D.石細胞單子葉植物
【單子葉維管束散狀排列】
48.在觀察雙子葉植物莖的初生結構橫切面時,如果用碘液染色,則能觀察到以下哪種現象:(1分)
A.在維管束外有一圈染成深藍色的細胞,相當於是內皮層;
B.在維管束外有一。圈染成深藍色的細胞,相當於是中柱鞘;
C.在表皮下有一圈染成深藍色的細胞,相當於是外皮層;
D.在表皮』F有一圈染成深藍色的細胞,相當二j二是厚角組織細胞
【向日葵皮層 :靠進表皮的幾層是切線壁加厚的厚角細胞。內為薄壁細胞,其中分布有樹脂道,皮層細胞含有葉綠體,細胞之間有細胞間隙,皮層的最內層細胞含澱粉粒,稱為澱粉鞘內皮)用碘液染色後,更為清楚】49.從生殖角度來看,被子植物的花和蕨類植物的孢子葉球的相同之處是:(1分)
A.都能進行有性生殖產生孢子; B.都能進行有性生殖產生配子;
C.都能進行無性生殖產生配子; D.都能進行無性生殖產生孢子
【蕨類植物是不產生種子的低等維管植物。具有明顯的世代交替現象。無性生殖時,在孢子體上產生孢子囊。在小型葉蕨類中,孢子葉通常集生在枝的頂端,形成球狀或穗狀,稱為孢子葉穗或孢子葉球。真蕨類孢子囊通常生在孢子葉的背面、邊緣或集生在一個特化的孢子葉上聚集成孢子囊群。囊群有蓋或無蓋。孢子囊內產生孢子,有同型與異型之分。】
Ⅳ 用sepharose4B柱層析分離蛋白質,這是() A離子交換柱層析 B吸附柱層析 C凝膠過濾柱層析 D分配柱層析
選c
親和柱/親和膜,都是醫用分離器.如除內毒素親和柱,以
Sepharose 4B為基質,配基為組氨酸,殼聚糖,季銨鹽等
你可以參考下面的鏈接
Ⅳ 如何分析對晶格形成很重要的氨基酸
氨基酸結構與分類
(一)基本氨基酸
組成蛋白質的20種氨基酸稱為基本氨基酸。它們中除脯氨酸外都是α-氨基酸,即在α-碳原子上有一個氨基。基本氨基酸都符合通式,都有單字母和三字母縮寫符號。
按照氨基酸的側鏈結構,可分為三類:脂肪族氨基酸、芳香族氨基酸和雜環氨基酸。
1.脂肪族氨基酸 共15種。
側鏈只是烴鏈:Gly, Ala, Val, Leu, Ile後三種帶有支鏈,人體不能合成,是必需氨基酸。
側鏈含有羥基:Ser, Thr許多蛋白酶的活性中心含有絲氨酸,它還在蛋白質與糖類及磷酸的結合中起重要作用。
側鏈含硫原子:Cys,
Met兩個半胱氨酸可通過形成二硫鍵結合成一個胱氨酸。二硫鍵對維持蛋白質的高級結構有重要意義。半胱氨酸也經常出現在蛋白質的活性中心裡。甲硫氨酸的硫原子有時參與形成配位鍵。甲硫氨酸可作為通用甲基供體,參與多種分子的甲基化反應。
側鏈含有羧基:Asp(D), Glu(E)
側鏈含醯胺基:Asn(N), Gln(Q)
側鏈顯鹼性:Arg(R), Lys(K)
2.芳香族氨基酸 包括苯丙氨酸(Phe,F)和酪氨酸(Tyr,Y)兩種。 酪氨酸是合成甲狀腺素的原料。
3.雜環氨基酸
包括色氨酸(Trp,W)、組氨酸(His)和脯氨酸(Pro)三種。其中的色氨酸與芳香族氨基酸都含苯環,都有紫外吸收(280nm)。所以可通過測量蛋白質的紫外吸收來測定蛋白質的含量。組氨酸也是鹼性氨基酸,但鹼性較弱,在生理條件下是否帶電與周圍內環境有關。它在活性中心常起傳遞電荷的作用。組氨酸能與鐵等金屬離子配位。脯氨酸是唯一的仲氨基酸,是α-螺旋的破壞者。
B是指Asx,即Asp或Asn;Z是指Glx,即Glu或Gln。
基本氨基酸也可按側鏈極性分類:
非極性氨基酸:Ala, Val, Leu, Ile, Met, Phe, Trp, Pro共八種
極性不帶電荷:Gly, Ser, Thr, Cys, Asn, Gln, Tyr共七種
帶正電荷:Arg, Lys, His
帶負電荷:Asp, Glu
(二)不常見的蛋白質氨基酸
某些蛋白質中含有一些不常見的氨基酸,它們是基本氨基酸在蛋白質合成以後經羥化、羧化、甲基化等修飾衍生而來的。也叫稀有氨基酸或特殊氨基酸。如4-羥脯氨酸、5-羥賴氨酸、鎖鏈素等。其中羥脯氨酸和羥賴氨酸在膠原和彈性蛋白中含量較多。在甲狀腺素中還有3,5-二碘酪氨酸。
(三)非蛋白質氨基酸
自然界中還有150多種不參與構成蛋白質的氨基酸。它們大多是基本氨基酸的衍生物,也有一些是D-氨基酸或β、γ、δ-氨基酸。這些氨基酸中有些是重要的代謝物前體或中間產物,如瓜氨酸和鳥氨酸是合成精氨酸的中間產物,β-丙氨酸是遍多酸(泛酸,輔酶A前體)的前體,γ-氨基丁酸是傳遞神經沖動的化學介質。
二、氨基酸的性質
(一)物理性質
α-氨基酸都是白色晶體,每種氨基酸都有特殊的結晶形狀,可以用來鑒別各種氨基酸。除胱氨酸和酪氨酸外,都能溶於水中。脯氨酸和羥脯氨酸還能溶於乙醇或乙醚中。
除甘氨酸外,α-氨基酸都有旋光性,α-碳原子具有手性。蘇氨酸和異亮氨酸有兩個手性碳原子。從蛋白質水解得到的氨基酸都是L-型。但在生物體內特別是細菌中,D-氨基酸也存在,如細菌的細胞壁和某些抗菌素中都含有D-氨基酸。
三個帶苯環的氨基酸有紫外吸收,F:257nm,ε=200; Y:275nm,ε=1400;
W:280nm,ε=5600。通常蛋白質的紫外吸收主要是後兩個氨基酸決定的,一般在280nm。
氨基酸分子中既含有氨基又含有羧基,在水溶液中以偶極離子的形式存在。所以氨基酸晶體是離子晶體,熔點在200℃以上。氨基酸是兩性電解質,各個解離基的表觀解離常數按其酸性強度遞降的順序,分別以K1'、K2'來表示。當氨基酸分子所帶的凈電荷為零時的pH稱為氨基酸的等電點(pI)。等電點的值是它在等電點前後的兩個pK'值的算術平均值。
氨基酸完全質子化時可看作多元弱酸,各解離基團的表觀解離常數按酸性減弱的順序,以pK1' 、pK2'
、pK3'表示。氨基酸可作為緩沖溶液,在pK'處的緩沖能力最強,pI處的緩沖能力最弱。
氨基酸的滴定曲線如圖。
(二)化學性質
1.氨基的反應
(1)醯化
氨基可與醯化試劑,如醯氯或酸酐在鹼性溶液中反應,生成醯胺。該反應在多肽合成中可用於保護氨基。
(2)與亞硝酸作用
氨基酸在室溫下與亞硝酸反應,脫氨,生成羥基羧酸和氮氣。因為伯胺都有這個反應,所以賴氨酸的側鏈氨基也能反應,但速度較慢。常用於蛋白質的化學修飾、水解程度測定及氨基酸的定量。
(3)與醛反應
氨基酸的α-氨基能與醛類物質反應,生成西佛鹼-C=N-。西佛鹼是氨基酸作為底物的某些酶促反應的中間物。賴氨酸的側鏈氨基也能反應。氨基還可以與甲醛反應,生成羥甲基化合物。由於氨基酸在溶液中以偶極離子形式存在,所以不能用酸鹼滴定測定含量。與甲醛反應後,氨基酸不再是偶極離子,其滴定終點可用一般的酸鹼指示劑指示,因而可以滴定,這叫甲醛滴定法,可用於測定氨基酸。
(4)與異硫氰酸苯酯(PITC)反應
α-氨基與PITC在弱鹼性條件下形成相應的苯氨基硫甲醯衍生物(PTC-AA),後者在硝基甲烷中與酸作用發生環化,生成相應的苯乙內醯硫脲衍生物(PTH-AA)。這些衍生物是無色的,可用層析法加以分離鑒定。這個反應首先為Edman用來鑒定蛋白質的N-末端氨基酸,在蛋白質的氨基酸順序分析方面佔有重要地位。
(5)磺醯化
氨基酸與5-(二甲胺基)萘-1-磺醯氯(DNS-Cl)反應,生成DNS-氨基酸。產物在酸性條件下(6NHCl)100℃也不破壞,因此可用於氨基酸末端分析。DNS-氨基酸有強熒光,激發波長在360nm左右,比較靈敏,可用於微量分析。
(6)與DNFB反應
氨基酸與2,4-二硝基氟苯(DNFB)在弱鹼性溶液中作用生成二硝基苯基氨基酸(DNP氨基酸)。這一反應是定量轉變的,產物黃色,可經受酸性100℃高溫。該反應曾被英國的Sanger用來測定胰島素的氨基酸順序,也叫桑格爾試劑,現在應用於蛋白質N-末端測定。
(7)轉氨反應
在轉氨酶的催化下,氨基酸可脫去氨基,變成相應的酮酸。
2.羧基的反應
羧基可與鹼作用生成鹽,其中重金屬鹽不溶於水。羧基可與醇生成酯,此反應常用於多肽合成中的羧基保護。某些酯有活化作用,可增加羧基活性,如對硝基苯酯。將氨基保護以後,可與二氯亞碸或五氯化磷作用生成醯氯,在多肽合成中用於活化羧基。在脫羧酶的催化下,可脫去羧基,形成伯胺。
3茚三酮反應
氨基酸與茚三酮在微酸性溶液中加熱,最後生成藍色物質。而脯氨酸生成黃色化合物。根據這個反應可通過二氧化碳測定氨基酸含量。
4.側鏈的反應
絲氨酸、蘇氨酸含羥基,能形成酯或苷。
半胱氨酸側鏈巰基反應性高:
(1)二硫鍵(disulfide bond)
半胱氨酸在鹼性溶液中容易被氧化形成二硫鍵,生成胱氨酸。胱氨酸中的二硫鍵在形成蛋白質的構象上起很大的作用。氧化劑和還原劑都可以打開二硫鍵。在研究蛋白質結構時,氧化劑過甲酸可以定量地拆開二硫鍵,生成相應的磺酸。還原劑如巰基乙醇、巰基乙酸也能拆開二硫鍵,生成相應的巰基化合物。由於半胱氨酸中的巰基很不穩定,極易氧化,因此利用還原劑拆開二硫鍵時,往往進一步用碘乙醯胺、氯化苄、N-乙基丁烯二亞醯胺和對氯汞苯甲酸等試劑與巰基作用,把它保護起來,防止它重新氧化。
(2)烷化
半胱氨酸可與烷基試劑,如碘乙酸、碘乙醯胺等發生烷化反應。
半胱氨酸與丫丙啶反應,生成帶正電的側鏈,稱為S-氨乙基半胱氨酸(AECys)。
(3)與重金屬反應
極微量的某些重金屬離子,如Ag+、Hg2+,就能與巰基反應,生成硫醇鹽,導致含巰基
追問:
的酶失活。
5. 以下反應常用於氨基酸的檢驗:
l酪氨酸、組氨酸能與重氮化合物反應(Pauly反應),可用於定性、定量測定。組氨酸生成棕紅色的化合物,酪氨酸為桔黃色。
l精氨酸在氫氧化鈉中與1-萘酚和次溴酸鈉反應,生成深紅色,稱為坂口反應。用於胍基的鑒定。
l酪氨酸與硝酸、亞硝酸、硝酸汞和亞硝酸汞反應,生成白色沉澱,加熱後變紅,稱為米倫反應,是鑒定酚基的特性反應。
l色氨酸中加入乙醛酸後再緩慢加入濃硫酸,在界面會出現紫色環,用於鑒定吲哚基。
在蛋白質中,有些側鏈基團被包裹在蛋白質內部,因而反應很慢甚至不反應。
三、色譜與氨基酸的分析分離
1.色譜(chromatography)的發展史
最早的層析實驗是俄國植物學家Цвет在1903年用碳酸鈣分離葉綠素,屬於吸附層析。40年代出現了分配層析,50年代出現了氣相色譜,60年代出現HPLC,80年代出現了超臨界層析,90年代出現的超微量HPLC可分離ng級的樣品。
2.色譜的分類:
按流動相可分為氣相、液相、超臨界色譜等;
按介質可分為紙層析、薄層層析、柱層析等;
按分離機制可分為吸附層析、分配層析、分子篩層析等
3.色譜的應用
可用於分離、制備、純度鑒定等。
定性可通過保留值、內標、標准曲線等方法,定量一般用標准曲線法。
氨基酸的分析分離是測定蛋白質結構的基礎。在分配層析和離子交換層析法開始應用於氨基酸成分分析之後,蛋白質結構的研究才取得了顯著的成就。現在這些方法已自動化。
氨基酸從強酸型離子交換柱的洗脫順序如下:
Asp,Thr,Ser,Glu,Pro,Gly,Ala,Cys,Val,Met,Ile,Leu,Tyr,Phe,Lys,His,(NH3),Arg
Ⅵ 軟膏與凝膠得區別
軟膏ǎngāo
(1)
[ointment]∶用於皮膚的含脂類或油脂類物質(如凡士林、豬油、羊毛脂)為基質的半固體葯物制劑
(2)
[unguent]∶潤滑劑或葯膏(如用於痛處或燒傷)gel ning jiao
又稱凍膠。溶膠或溶液中的膠體粒子或高分子在一定條件下互相連接,形成空間網狀結構,結構空隙中充滿了作為分散介質的液體(在干凝膠中也可以是氣體),這樣一種特殊的分散體系稱作凝膠。沒有流動性。內部常含有大量液體。例如血凝膠、瓊脂的含水量都可達99%以上。可分為彈性凝膠和脆性凝膠。彈性凝膠失去分散介質後,體積顯著縮小,而當重新吸收分散介質時,體積又重新膨脹,例如明膠等。脆性凝膠失去或重新吸收分散介質時,形狀和體積都不改變,例如硅膠等。由溶液或溶膠形成凝膠的過程稱為膠凝作用(gelation)。 [編輯本段]生物學和凝膠 生物分子下游純化的對象一般包括蛋白、酶、重組蛋白、單抗、抗體及抗原、肽類、病毒、核酸等。純化前首先需要測定生物分子的各物理和化學特性,然後通過實驗選擇出最有效的純化流程。
1.測定——分子量、PI
當目標蛋白的物理特性如分子量、PI等都不清楚時,可用PAGE電泳方法或層析方法加以測定。分離范圍廣闊的Superose HR預裝柱很適合測定未知蛋白的分子量。用少量離子交換介質在多個含不同PH緩沖液的試管中,可簡易地測出PI,並選擇純化用緩沖液的最佳PH.
2.選擇——層析方法
若對目標蛋白的特性或樣品成分不太了解,可嘗試幾種不同的純化方法:
一] 使用最通用的凝膠過濾方法,選擇分離范圍廣闊的介質如Superose、Sephacryl HR依據分子量將 樣品分成不同組份。
二] 用含專一配體或抗體的親和層析介質結合目標蛋白。亦可用各種活化偶聯介質偶聯目標蛋白的底物、受體等自製親和介質,再用以結合目標蛋白。一步即可得到高純度樣品。
三] 體積大的樣品,往往使用離子交換層析加以濃縮及粗純化。高鹽洗脫的樣品,可再用疏水層析純化。疏水層析利用高鹽吸附、低鹽洗脫的原理,洗脫樣品又可直接上離子交換等吸附性層析。兩種方法常被交替使用於純化流程中。
3.純化——大量粗品
處理大量原液時,為避免堵塞柱子,一般使用sepharose big beads、sepharoseXL、sepharose fast flow等大顆粒離子交換介質。擴張柱床吸附技術利用多種STREAMLINE介質,直接從含破碎細胞或組織萃取物的發酵液中俘獲蛋白。將離心、超濾、初純化結合為一。提高回收率,縮短純化周期。
4.純化——硫酸氨樣品 硫酸氨沉澱方法常被用來初步凈化樣品,經處理過的樣本處於高鹽狀態下,很適合直接上疏水層析。若作離子交換,需先用Sephadex G-25脫鹽。疏水層析是較新技術,隨著介質種類不斷增多,漸被融入各生產工藝中。利用Hitrap HIC Test Kit 和RESOURCE HIC Test Kit可在八種疏水介質中選擇最適合介質及最佳的純化條件。低鹽洗脫的樣品可稍加稀釋或直接上其它吸附性層析。
5.純水——糖類分子
固化外源凝訂素如刀豆球蛋白、花生、大麥等凝集素,可結合碳水化合物的糖類殘基,很適合用作分離糖化細胞膜組份、細胞、甚至亞細胞細胞器,純化糖蛋白等。兩種附上外源凝集素的Sepharose 6MB親和層析介質,專為俘獲整個細胞或大復合物,如膜囊等。
6.純化——膜蛋白
膜蛋白分離常使用去污劑以保持其活性。離子性去污劑應選用與目標蛋白相反電荷者,避免在作離子交換時和目標蛋白競爭交換介質,籍此除去去污劑。非離子性去污劑可以疏水層析除去。
7.純化——單抗、抗原 *單抗多為IgG.來源主要是腹水和融合瘤培養上清液。腹水有大量白蛋白、轉鐵蛋白和宿主抗體等。Mabselect、Protein G和Protein A對IgG的Fc區有專一性親和作用,能一步純化各種不同源的IgG.血清互補劑如小牛血清可先用蛋白G預處理,在培養前除去IgG.重組蛋白A介質Mabselect和rProtein A Sepharose FF對IgG有更高的載量和專一性,基團脫落更少。脫落的rProtein A用離子交換Q Sepharose HP或凝膠過濾Superdex 200,很容易去除。
*疏水層析Phenyl Sepharose HP亦很適合純化IgG.宿主抗體和污染IgG可用凝膠過濾Superdex 200在精細純化中去除。
*純化IgG抗原最有效的方法是用活化偶聯介質如CNBr、NHs activated Sepharose FF偶聯IgG,再進一步獲取IgG抗原。
*HiTrap IgM是用來純化融合瘤細胞培養的單抗IgM,結合量達5mg IgM.HiTrap IgY是專門用來純化IgY,結合量達100mg純IgY.
8.純化——重組蛋白 重組蛋白在設計、構建時應已融入純化構想。樣品多夾雜了破碎細胞或溶解產物,擴張柱床吸附技術STREAMLINE便很適合做粗分離。Amersham biosciences提供三個快速表達、一步純化的融合系統。
一] GST融合載體使要表達的蛋白和谷胱甘肽S轉移酶一起表達,然後利用Glutathione Sepharose 4B作親和層析純化,再利用凝血酶或因子Xa切開。
2. 蛋白A融合載體使要表達的蛋白和蛋白A的IgG結合部位融合在一起表達,以IgG Sepharose 6 FF純化。
二] 含組氨酸標記(Histidine-tagged)的融合蛋白可用Chelating Sepharose FF螯合Ni2+金屬,在一般或變性條件(8M尿素)下透過組氨酸螯合融合蛋白。HisTrap試劑盒提供整套His-Tag蛋白的純化方法。
9.純化——包涵體蛋白
包涵體蛋白往往需溶於6M鹽酸胍或8M尿素中。高化學穩定性的Superose 12及Sepharose 6FF凝膠過濾介質很適合在變性條件下做純化。變性純化後的蛋白需要復性至蛋白的天然構象。Superdex 75、Q Sepharose FF和Phenyl Sepharose FF分別被發現有助包涵體蛋白的復性。一般包涵體蛋白樣品的純度越高,復性效果越好。SOURCE 30 RPC反相層析介質很適合純化復性前的粗品,並可以1MnaOH重生。此方法純化後的包涵體蛋白,復性回收率明顯提高。
10.包涵體蛋白固相復性 *近年許多文獻報導將包涵體蛋白在變性條件下固定(吸附)在層析介質上,一般用各種Sepharose FF離子交換層析介質。去除變性劑後,蛋白在介質上成功復性,再將復性好的蛋白洗脫下來。固相復性避免了一般復性過程中蛋白質聚體的形成,所以復性得率更高,而且無需大量稀釋樣品,並將復性和初純化合二為一,大大節省時間及提高回收率。
*固相復性方法也被用於以HiTrap Chelating金屬螯合層析直接復性及純化包涵體形式表達的組氨酸融合蛋白;以HiTrap Heparin肝素親和層析直接復性及純化包涵體形式表達的含多個賴氨酸的融合蛋白。兩種親和層析預裝柱均可反復多次重復使用,比一般試劑盒更方便、耐用。
11.純化——中草葯有效成分
中葯的化學成分極其復雜。傳統中葯多是煎熬後服用,有效成份多較為親水,包括生物鹼、黃酮、蒽醌、皂甙、有機酸、多糖、肽和蛋白質。靈活及綜合性地利用多種層析方法。如離子交換、分子篩、反相層析,更容易分離到單一活性成分。Sephadex LH-20葡聚糖凝膠同時具備吸附性層析和分子篩功能,例:如用甲醇分離黃酮甙,三糖甙先被洗下來,二糖甙其次,單糖甙隨後,最後是甙元。Sephadex LH-20可使用水、醇、丙酮、氯仿等各種試劑,廣泛用於各種天然產物的分離,包括生物鹼、甙、黃酮、醌類、內脂、萜類、甾類等。
*生物鹼在酸性緩沖液中帶正電,成為鹽,HiTrap SP陽離子交換層析柱可以分離許多結構非常近似的生物鹼。相反,黃酮、蒽醌、皂甙、有機酸等可溶於偏鹼的緩沖液中,在HiTrap Q陰離子交換柱上分離效果良好。
*一般多糖純化大多使用分子篩如Sephadex,Sephacryl.若分子量在600KD以下,並需更高解析度,可選擇新一代的Superdex.一般植物可能含水溶性、酸溶性、鹼溶性多種多糖。綜合利用分子篩及離子交換層析有助進一步獲各組份純品。另外,多糖葯物需去除可引起過敏的蛋白質,傳統Sevag方法用丁醇脫蛋白需反復數十次。陰陽離子交換法可以一、兩步快速去除多糖中殘存的蛋白質。SOURCE5、15、30RPC反相層析也很適合各種中葯有效成分的檢測、分離和放大制備。由於中葯的成分非常復雜,SOURCE反相層析可用范圍為PH1-14 ,並可用1M NaOH,1M HCL清洗、再生。比傳統硅膠反相層析更易於工藝優化及在位清洗,壽命也更長。
12.純化——肽類
肽類的來源有天然萃取,合成肽和重組肽三種。肽容易被酶降解,但可從有機溶劑或促溶劑中復性,所以多以高選擇性的反相層析如SOURCE 30RPC、SOURCE 15RPC、SOURCE 5RPC或離子交換Minibeads、Monobeads作純化。Superdex Peptide HR是專為肽分子純化設計的凝膠過濾預裝柱,能配合反相層析做出更精美的肽圖。肽分子制備可用離子交換配合凝膠過濾Superdex 30 PG。醫學都市多功能
13.純化——核酸、病毒
核酸的純化用於去除影響測序或PCR污染物等研究。核酸可大致上分為質粒DNA、噬菌體DNA和PCR產物等。病毒也可視作核酸大分子,和質粒DNA一樣,可用分離大分子的Sephacry S-1000 SF、Superose或Sepharoce 4FF凝膠過濾介質去除雜蛋白,再配合離子交換如Mono Q、 SOURCE Q分離核酸。
14.純化——寡核苷酸寡酸苷酸多應用在反義(anti-sense)DNA、RNA測序、PCR和cDNA合成等研究。合成後含三苯甲基的寡核苷酸以陰離子交換的Mono Q或快速低反壓的SOURCE Q在PH12下可除副產物,並避免凝集和保護基的脫落。載量大大高過反相層析,可用做大量制備。不含三苯甲基的失敗序列可用反相柱ProRPC去除。
15.脫鹽、小分子去除
使用凝膠過濾介質Sephadex G10,G15,G25,G50等去除小分子,效率高,處理量可達床體積30%.只需在進樣後收集首1/3-1/2柱體積的洗脫液,就可以去除該填料分離范圍上限以下的小分子,簡單直接。由於只是去除小分子,柱高10cm以上即可。整個過程一般可於數分鍾至半小時完成。Sephadex G25系列介質專為蛋白質脫鹽而設計,預裝柱HiTrap Desalting(5ml)可用針筒操作。HiPrep Desalting(26ml)可在數分鍾為多至10ml樣品脫鹽。
16.疫苗純化 使用凝膠過濾介質Sepharose 4FF純化疫苗,去除培養基中的雜蛋白,處理量可大於床體積10%.柱高一般40-70cm,整個過程約半至一小時。目前使用此法生產的疫苗品種有乙肝、狂犬、出血熱、流感、肺結核、小兒麻痹疫苗等。分子量較小的疫苗可使用Sephacryl S-500HR,如甲肝疫苗等。
17.抗生素聚合物分析
中國葯典從2000年版起要求抗生素頭孢曲松鈉需要找出聚合物占產品的白分比,規定使用Sephadex G10凝膠過濾法測定。
18.純化-基因治療用病毒載體
SORRCE 15Q
19.純化-基因治療用質粒
Q Sepharose XL,SOURCE 15Q,STREAMLINE Q,Sephacryl S500,Plasmidselect 在下游純化中,可應用不同層析技術在純化生物分子的同時,去除各種污染物。
1.去除——內毒素
內毒素又稱熱原。含脂肪A、糖類和蛋白,是帶負電的復合大分子。
內毒素的脂肪A部份有很強的疏水性。但在高鹽下會凝集,無法上疏水層析。利用疏水層析試驗盒(17-1349-01)可選擇結合目標蛋白的介質而去除內毒素。
內毒素與陰離子交換介質Q或DEAE Sepharose Fast Flow有較強結合。可在洗脫目標蛋白後用高鹽緩沖液或NaOH去除。
利用CNBr或NHS Sepharose FF可偶聯內毒素底物如LAL,PMB,自動成親合層析介質結合內毒素。內毒素經常是多聚體,凝膠過濾層析可有效地將之去除。
2.去除——蛋白中的核酸
大量核酸增加樣本黏度,令區帶擴張,反壓增加,降低解析度和流速。葯審和食檢對核酸含量也有嚴格限制。
胞內表達蛋白的核酸問題尤其嚴重。核酸帶陰電荷,在初步純化時利用陽離子交換介質如STREAMLINESP,SP Sepharose Big Beads,SP或CM Sepharose FF,SP SepharoseXL結合目標蛋白,可除去大量核酸。
核酸在高鹽下會和蛋白解離,疏水層析介質很適合用來結合目標蛋白,在純化蛋白的同時去除核酸。
利用核酸酶將核酸切成小片斷,用凝膠過濾做精細純化時便很容易去除了。
3.去除——病毒和微生物
病毒和微生物可成為病原,應盡量減除。結合不同層析技術,使用注射用水,用NaOH定期進行儀器和凝膠的在位消毒和在位清洗,皆可避免污染物增加。
病毒大都有脂外殼。可用與目標蛋白電荷相反的S/D(solvent/detergent)處理,使病毒失活,如Triton和Tween.再用適當的離子交換介質如CM Sepharose FF結合目標蛋白,去除S/D.
其它污染物可以改變pH和離子強度使其從目標分子中解離或失活,凝膠過濾介質Superdex及多種吸附性介質,SOURCE都是很好的精細純化介質,可去除多種微量污染物。
凝膠是指顆粒大小在1埃到10埃之間的混合物。高分子溶液和某些溶膠,在適當的條件下,整個體系會轉變成一種彈性的半固體狀態的稠厚物質,失去流動性。這種現象稱為膠凝作用,所形成的產物叫做凝膠或凍膠.
「氣凝膠」是指分散系為氣態的,如:雲,霧等,「固凝膠」有煙水晶等,「液凝膠」就是呈液態的膠體,如氫氧化鐵膠體 。 [編輯本段]舉例:
食品級葡甘露膠(Gum Konjac-GM)
葡甘露膠(又稱:魔芋膠)系一種新型多用途微粒狀可食用膠。這里推出之葡甘露膠是以優質魔芋中提取的葡萄甘露聚糖為原料,經脫雜處理後採用先進技術加工而成,其中添加成分不含任何非食用化學配料或色素。與傳統的瓊脂、果膠、海藻膠等食品添加劑相比,葡甘露膠在膨脹率、粘度、增稠、穩定性及使用方便程度上皆顯著優於上述膠類,此外尚具有特殊的優點:無需添加任何凝固劑,在無糖、低糖或高糖條件下,在酸性、中性或鹼性條件下,常溫即可凝凍,凝膠性能理想;保持或強化了葡萄甘露聚糖所具有的降糖、降脂、減肥等保健功能,大大拓寬了魔芋應用的范圍;價格低廉、使用方便。
葡甘露膠能廣泛用於食品、飲料、醫葯、日用化工、科研等領域,作為瓊脂、果膠、海藻膠等的替代產品,價格低廉,且使用時無需改變原有的設備及工藝,能大幅度降低添加劑的使用成本,是一種理想的新型凝膠添加劑。為滿足不同產品開發的需要, 一、凝膠(果凍)型:能與各種天然果汁、物料及色素良好混合,作為廣譜凝膠賦型劑,是製作果凍、水晶軟糖等的極佳原料,也可作為培養基支持體,且不需再添加其它任何膠類或鹼性成份;凝膠成型條件隨意、脫杯完整,凝膠強度高、韌性大。 用量:0.7~0.9%。用法:在適量溫水中溶脹3~5分鍾,煮沸冷至70度左右時加入糖及各種配料,冷卻至室溫即成。
二、培養基型:用作替代瓊脂作為花卉及其它植物進行組織培養的支持體。組培苗根粗、苗壯,使用效果理想,成本大幅降低。用量:0.5~0.6%。用法:在溫水中溶脹3~5分鍾,煮沸後冷卻即可。 三、果肉(茶)飲料型:作為穩定劑與懸浮劑,替代瓊脂和羧甲基纖維素等,廣泛用於粒粒橙、果茶、果汁、豆奶、銀耳羹、八寶粥等異相懸浮劑等(或混合)飲料中,防止沉澱或分層。 用量:0.15~0.25%左右。用法:在適量溫水中充分溶脹後加入物料中。 四、冷凍製品型:用於冰棒、冰淇淋等各種冷凍製品,可增大膨脹,減少冰晶,提高抗熱融性,使產品更加爽口。 用量:0.15~0.25%左右。用法:在適量溫水中充分溶脹後加入物料中。 五、增稠型:用於果醬、米、面製品中,可增大膨脹率,提高韌性,改善賦型和口感。是進口洋槐豆膠的理想替代物。 用量:0.2~0.3%左右。用法:在適量溫水中充分溶脹後加入物料中。
Ⅶ 求天津2010生物競賽試題,謝
.在細胞質膜的組成中,膽固醇分子 (1分)
A.僅存在於高等動物細胞中 B.僅存在於高等植物細胞中
C.高等動植物細胞中都存在 D.還未確定
2.細胞質膜上具備的鈉鉀泵每消耗一一個ATP分子將會 (1分)
A.向細胞內轉入2個K+向細胞外轉出2個Na+
B.向細胞內轉入2個Na+向細胞外轉出2個K+
C.向細胞內轉入3個K+向細胞外轉出2個Na+
D.向細胞內轉入2個K+向細胞外轉出3個Na+
3.構成溶酶體的各種酶完成合成最終是在那一個部位 (1分)
A.在游離核糖體上
B.在粗面內質網的核糖體上
C.同時在游離和粗面內質網核糖體上
D.在這兩種核糖體上輪流進行
4.下列分子中不能通過無蛋白脂雙層膜的是哪一項 (1分)
A.二氧化碳 B.乙醇 C.尿素 D.葡萄糖
5.以下哪種組蛋白不屬於核小體的核心蛋白 (1分)
A.Hl B.H2A C.H2B D.I-13 E.H4
6.下列哪些細胞器具有質子泵 (2分)
A.內質網 B.高爾基體C.溶酶體 D.線粒體 E.葉綠體
7. 線粒體在合成ATP過程中需要下列哪些條件 (2分)
A.基質中含有0: B.基質中含ADP
C.基質中的H+濃度大於膜間隙D.基質中的H+濃度小於膜間隙
8.在細胞減數分裂過程中會出現下列哪些現象 (2分)
A.同源染色體配對 B.DNA復制
C.同源染色體間交換 D.基因發生變異
9.電子顯微鏡下的細胞質膜體現出「暗一亮一暗」的結構,一般認為主要原因有哪些:(2 分)
A.磷脂分子的親水頭易被染色 B.外在膜蛋白的存在
C.胞外基質和膜下細胞骨架的存在 D.跨膜蛋白的存在
10.下面關於組蛋白的說法哪些是正確的:(3分)
A.組蛋白普遍存在於真核細胞;
B.組蛋白在物種間很保守,進化緩慢;
C.組蛋白富含組氨酸;
D.組蛋白呈現鹼性;
E.組蛋白的修飾會影響基因的表達。
11.人體內嘌呤核苷酸分解代謝的主要終產物是以下哪一種? (1分)
A.尿素; B.尿酸; C.丙氨酸;D.肌酸;E.肌酸酐
12.Q—D一葡萄糖和B-D-葡萄糖的主要區別是下列哪一個? (1分)
A.第l位碳原子上的羥基 B.第2位碳原子上的羥基
C.第5位碳原子上的羥基 D.第4位碳原子上的羥基
13.按照脂肪酸的分類,油酸應該屬於哪一類脂肪酸? (1分)
A.軟脂肪酸 B花生四烯酸 C.硬脂肪酸 D.不飽和脂肪酸
14.在氨基酸的分類中,下面哪一個氨基酸屬於芳香族氨基酸?(1分)
A.丙氨酸 B.絲氨酸 C.色氨酸 D.亮氨酸
15.蛋白質的肽鍵是以下列哪一種方式形成的? (1分)
A.a一氨基與a一羧基縮合而成 B.a一氨基與B~羧基縮合而成
C.岱一氨基與a一羧基縮合而成D.D一氨基與B一羧基縮合而成
16.下列哪一個是DNA和RNA二者的主要區別? (1分)
A、(酯鍵),B、(核糖).C、(鹼基),D、(磷酸基)。
17.同工酶具有以下哪個特性?(1分)
A.具有相同的蛋白質分子結構 B.理化性質相同
C.催化相同的化學反應 D.免疫性能相同
18.使用離心機離心l00毫升樣品之前最重要的操作步驟是平衡,正確的操作是以下哪一個?(1分)
A.目測
B.用量筒量取同樣體積的樣品溶液分別倒入兩個離心管中
C.用托盤天平平衡兩個離心管,然後將樣品溶液分別倒入離心管
D.將樣品溶液分別倒入兩個離心管中,然後用托盤天平進行平衡
19以下關於酶的描述,哪些是不正確的?(2分)
A大多數酶的化學本質是蛋白質
B.所有的酶都必須結合輔基或輔酶才能發揮催化作用;
C.都具有立體異構專一性
D.能顯著地改變化學反應速率
20.在生物大分子的分離純化過程中,能將生物大分子與無機鹽及有機小分子分離的方法
是以下哪些? (3分)
A.離子交換層析 B.凝膠過濾層析
C.濾紙過濾 D.透析 E.離心
21.植物的微生物病害可引起植物機能失靈,代謝紊亂而導致植物生存能力下降,甚至死亡或極大地減少產量。哪種菌是較少引起植物致病的微生物?(1分)
A.細菌B.放線菌 C.黴菌 D.植物病毒
22.巴斯德採用曲頸瓶試驗來驗證下列哪種學說?(1分)
A.駁斥自然發生說 B.證明微生物致病
C.認識到微生物的化學結構 D.提出自然發生說
23.普通光學顯微鏡用油鏡觀察時鏡油應該加在哪個部位?(1分)
A.標本上 B.物鏡上 C.標本和物鏡之間 D.目鏡上
24.接種環的燒灼滅菌應該在何時進行?(1分)
A使用前 B.使用後 C使用前及使用後 D.儲存前
25.高壓蒸汽滅菌鍋的滅菌原理是以下哪一項?(1分)
A.高壓 B.高溫 C.高濕 D.高壓加高濕
26.微生物固體培養時通常用的器皿是哪一種?(1分)
A.三角瓶 B.試管 C.試劑瓶 D.培養皿
27.微生物固體培養時培養基中瓊脂的作用是哪一種?(1分)A
A.凝固劑 B.營養劑 C.生長調節劑 D.無機鹽
28.以下哪些菌種可用於生產酸奶?(2分)
A.枯草芽孢桿菌 B.嗜熱鏈球菌C.保加利亞乳桿菌 D.灰色鏈黴菌
29.微生物產生的具有溫室效應的氣體有哪些? (2分)
A.C02 B.N2 C.CH4 D.N20 .
Ⅷ 離子交換層析和親和層析都可以用來分離所有的蛋白質嗎哪種的效果更好
這個你問的太籠統了,方法沒有最好的,只有最合適的
蛋白的分離純化無非是內利用目標蛋白和容別的蛋白不同進行分離,這包括分子量大小,電荷,極性等特性的不同,此外包括別的特性,特別是酶例如酶需要輔酶象蘋果酸 脫氫酶,或者底物,酶抑制劑,金屬離子等,那相對應的純化方法有凝膠過濾,離子交換,疏水層析,後面的可以分別把底物,酶抑制劑,金屬離子偶聯或鰲合到介質上做親和介質,而象果酸脫氫酶也可以用染料親和的辦法,因為染料的結構和NAD類似。糖蛋白可以用凝集素親和或者苯硼酸瓊脂糖親和分離等方法,總之要盡 量多知道目標蛋白的特性和了解各種分離的手段,就很容易找到最有效的分離純化的方法。