破碎過濾層析

❶ 蛋白質分離提純方法

1、鹽析法：

鹽析法的根據是蛋白質在稀鹽溶液中，溶解度會隨鹽濃度的增高而上升，但當鹽濃度增高到一定數值時，使水活度降低，進而導致蛋白質分子表面電荷逐漸被中和，水化膜逐漸被破壞，最終引起蛋白質分子間互相凝聚並從溶液中析出。

2、有機溶劑沉澱法：

有機溶劑能降低蛋白質溶解度的原因有二：其一、與鹽溶液一樣具有脫水作用；其二、有機溶劑的介電常數比水小，導致溶劑的極性減小。

3、蛋白質沉澱劑：

蛋白質沉澱劑僅對一類或一種蛋白質沉澱起作用，常見的有鹼性蛋白質、凝集素和重金屬等。

4、聚乙二醇沉澱作用：

聚乙二醇和右旋糖酐硫酸鈉等水溶性非離子型聚合物可使蛋白質發生沉澱作用。

(1)破碎過濾層析擴展閱讀：

吸附層析

1、吸附柱層析

吸附柱層析是以固體吸附劑為固定相，以有機溶劑或緩沖液為流動相構成柱的一種層析方法。

2、薄層層析

薄層層析是以塗布於玻板或滌綸片等載體上的基質為固定相，以液體為流動相的一種層析方法。這種層析方法是把吸附劑等物質塗布於載體上形成薄層，然後按紙層析操作進行展層。

3、聚醯胺薄膜層析

聚醯胺對極性物質的吸附作用是由於它能和被分離物之間形成氫鍵。這種氫鍵的強弱就決定了被分離物與聚醯胺薄膜之間吸附能力的大小。

層析時，展層劑與被分離物在聚醯胺膜表面競爭形成氫鍵。因此選擇適當的展層劑使分離在聚醯胺膜表面發生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的連續過程，就能導致分離物質達到分離目的。

❷ 紙層析實驗的詳細內容及用途

紙層析法又稱紙色譜法。以紙為載體的色譜法。固定相一般為紙纖維上吸附的水分，流動相為不與水相溶的有機溶劑；也可使紙吸留其他物質作為固定相，如緩沖液，甲醯胺等。將試樣點在紙條的一端，然後在密閉的槽中用適宜溶劑進行展開。當組分移動一定距離後，各組分移動距離不同，最後形成互相分離的斑點。將紙取出，待溶劑揮發後，用顯色劑或其他適宜方法確定斑點位置。根據組分移動距離（Rf值）與已知樣比較，進行定性。用斑點掃描儀或將組分點取下，以溶劑溶出組分，用適宜方法定量（如光度法、比色法等）。在環境分析測試中，有時用紙層析法分離試樣組分，它用於一些精度不高的分析，如3，4-苯並芘。但不如GC、HPLC應用普遍。紙層析法可分為一般紙層析法，圓形紙層析法、反相紙層析法和雙向紙層析法。等
用途
通常可用於葉綠素的色素成分檢驗，氨基酸的鑒定及測定，橘皮精油成分檢驗及一些特定細胞篩查等實驗。
原理
紙層析法依據極性相似相溶原理，是以濾紙纖維的結合水為固定相，而以有機溶劑作為流動相。由於樣品中各物質分配系數不同，因而擴散速度不同，從而達到分離的目的。 試樣經層析後可用比移值（Rf）表示各組成成分的位置（比移值=原點中心至色譜斑點中心的距離與原點中心至流動相前沿的距離之比），由於影響比移值的因素較多，因此一般採用在相同實驗條件下對照物質對比以確定其異同。作為單體鑒別時，試樣所顯主色譜斑點的顏色（或熒光）與供置，應與對照（標准）樣所顯主色的譜斑點或供試品-對照品（1∶1）混合所顯的主色譜斑點相同。作為質量指標（純度）檢查時，可取一定量的試樣，經展開後，按各單體的規定，檢視其所顯雜質色譜斑點的個數或呈色（或熒光）的強度。作為含量測定時，可將色譜斑點剪下洗脫後，再用適宜的方法測定，也可用色譜掃描儀測定。
色譜系統
固定相一般為紙纖維上吸附的水分，流動相為不與水相溶的有機溶劑；也可使紙吸留其他物質作為固定相，如緩沖液，甲醯胺等。
編輯本段應用
操作方法
將試樣點在紙條的一端，然後在密閉的槽中用適宜溶劑進行展開。當組分移動一定距離後，各組分移動距離不同，最後形成互相分離的斑點。將紙取出，待溶劑揮發後，用顯色劑或其他適宜方法確定斑點位置。根據組分移動距離（Rf值）與已知樣比較，進行定性。用斑點掃描儀或將組分點取下，以溶劑溶出組分，用適宜方法定量（如光度法、比色法等）。
應用及實例介紹
在環境分析測試中，有時用紙層析法分離試樣組分，它用於一些精度不高的分析，如3，4-苯並芘。但不如GC、HPLC應用普遍。在做葉綠體色素分離時用到,將葉片碾碎，浸出綠色液體，將液體與層析液（石油醚）混合，將濾紙一段進入混合液體，四種色素在層析液中的溶解度不同，在濾紙上留下4條色素帶。由此觀查出各種色素的相對含量和種類。 紙層析法一般用於葉綠體中色素的分離，葉綠體中色素主要包括胡蘿卜素、葉黃素、
[1]葉綠素a、葉綠素b，它們在層析液中的溶解度不同，溶解度大的隨層析液在濾 紙上擴散地快，反之則慢；含量較多者色素帶也較寬。最後在濾紙上留下4條色素帶，所以利用紙層析法 能清楚地將葉綠體中的色素分離。
注意事項
紙層析法中所用的有機溶劑如丙酮等，一般有揮發性、並有一定毒性，使用時要注意密封層析，避免吸入過多有害揮發物。
編輯本段實驗
儀器葯品
大試管 台天平 研缽(配帶孔紙板,防止丙酮揮發) 量筒 燒杯 漏斗 軟木塞 濾紙 丙酮（可用無水乙醇替代） 四氯化碳 無水硫酸鈉 碳酸鈣 石英砂
操作步驟
1．稱取新鮮葉子2g，放入研缽中加丙酮5ml，少許碳酸鈣(防止葉綠素被破壞）和石英砂（幫助研磨），研磨成勻漿，再加丙酮5ml，然後以漏斗過濾之，即為色素提取液。 2．取准備好的濾紙條（2×20cm），將其一端剪去兩側，中間留一長約1.5cm，寬約0.5cm的窄條，並在濾紙剪口上方折疊出一條直線，作為畫濾液細線的基準線。 3．用毛細吸管沾少許濾液在折線上描繪4~5次，注意要畫得勻、直、細，每次畫完細線要等其自然變干後再畫第二根線。 4．在大試管中加入四氯化碳3梍5ml及少許無水硫酸鈉（即層析液）。然後將濾紙條固定於軟木塞上，插入試管內，使窄端浸入溶劑中（色素點要略高於液面，濾紙條邊緣不可碰到試管壁），蓋緊軟木塞，直立於陰暗處進行層析。 經過0.5—1小時後，觀察分離後色素帶的分布。最上端橙黃色為胡蘿卜素，其次黃色為葉黃素，再下面藍綠色為葉綠素a，最後的黃綠色為葉綠素b。[1]
普通高中相關實驗
植物葉綠體中色素的提取與分離 用具：剪刀一把、乾燥的定性濾紙、50ml的燒杯及100ml的燒杯各3個、白紙3張、試管架一個、研缽一個、玻璃漏斗一個、尼龍布或紗布、毛細血管一隻、葯勺一個、10ml量筒一隻，天平一隻，試管3支、紙板一塊、棉塞3個、培養皿3個、刻度尺、注射器一隻、蓋玻片 試劑：丙酮、無水乙醇、層吸液（20份石油醚、2份丙酮、1份苯配置而成）、二氧化硅、碳酸鈣、碳酸鈉 材料：新鮮的菠菜葉、青菜葉、大葉黃楊葉片 背景資料： 1、 葉綠素等是脂溶性的有機分子，根據相似相溶的原理，葉綠素等色素分子溶於有機溶劑而不溶於有極性的水。故在研磨和收集葉綠色素時要用丙酮或乙醇等有機溶劑而不用水。 2、 葉綠素分布於基粒的片層薄膜上，加入少許二氧化硅是為了磨碎細胞壁、質膜、葉綠體被膜和光合片成，使色素溶解於丙酮中。 3、 破碎的細胞中含有草酸等有機酸，葉綠素分子中含有的Mg元素處於不穩定化合態，鎂離子與有機酸結合將導致色素分子破壞。加入少許碳酸鈣使得鈣離子與有機酸結合，減少鎂離子的轉移，防止研磨時葉綠體色素的破壞。所以在研磨時加入適量的碳酸鈣，同時加入碳酸鈉的道理亦如此。 4、 在過濾時選用脫脂棉或紗布，而不用濾紙。原因主要有下：（1）色素分子比較大，不容易透過濾紙； （2）濾紙有較強的吸附性而使色素吸附在濾紙上，從而降低色素濃度，影響實驗效果；（3）葉綠素是脂溶性，根據相似相容的原理，脫脂棉可以減少實驗過程中色素的流失，增強實驗效果。 5、 根據物理學中的毛細現象，畫濾紙細線前濾紙必須經過乾燥處理，是為了阻止水分子堵塞濾紙中的毛細管而影響層析液的擴散。但如果用火烤的話，會使濾紙纖維變形同時破壞啦毛細管，而影響層析液的擴散。 6、 由於液面的不同位置表面張力不同，紙條接近液面時，其邊緣的表面的張力較大，層析液沿濾紙邊緣擴散過快，而導致色素帶分離不整齊的現象。故而，在插入層析液的濾紙條一端剪去兩個角。 7、 為了防止濾紙條倒入層析液中而使層析實驗失敗。同時，防止因液體表面張力引起層析液沿濾紙條向上的「壁流」而導致色素溶解。 8、 色素分離的原理：紙層析是用濾紙作為載體的一種色層分析法，其原理主要是利用混合物中各組分在；流動相和固定相的分配比（溶解度）的不同而使之分離。濾紙上吸附的水為固定相（濾紙纖維常能吸20%左右的水），有機溶劑如乙醇等為流動相，色素提取液為層析試樣。把試樣點在濾紙的濾液細線位置上，當流動相溶劑在濾紙的毛細管的作用下，連續不斷地沿著濾紙前進通過濾液細線時，試樣中各組份便隨著流動相溶劑向前移動，並在流動相和固定相溶劑之間連續一次有一次的分配。結果分配比比較大的物質移動速度較快，移動距離較遠；分配比較小的物質移動較慢，移動距離較近，試樣中各組分分別聚集在濾紙的不同的位置上，從而達到分離的目的。

❸ 下列關於酶工程的敘述，正確的是（）A．酶的分離提純要依次經過過濾、層析、沉澱、提純等步驟B．尿糖

A、酶的分離提純要依次經過選材、破碎細胞、抽提、純化、制劑等步驟，故A錯誤；
B、尿糖試紙中含有葡萄糖氧化酶和過氧化氫酶，故B錯誤；
C、酶的固定主要是為了讓酶在催化過程中尤其是液相反應催化過程中以固相形式參與而採用的一種方法方法，並不是酶的分離純化的方法，故C錯誤；
D、酶的固定化技術是指將酶固定在不溶於水的承載物上，或者使酶交聯在一起，故D正確．
故選D．

❹ 細胞內蛋白質大分子怎麼分離純化

蛋白質分離提純的一般原則
1. 前處理
把蛋白質從原來的組織或溶解狀態釋放出來，保持原來的天然狀態，並不丟
失生物活性。常用的方法：勻漿器破碎、超生波破碎、纖維素酶處理以及溶菌酶等。
超聲波破碎法：當聲波達到一定頻率時，使液體產生空穴效應使細胞破碎的技術。超聲波引起的快速振動使液體局部產生低氣壓，這個低氣壓使液體轉化為氣體
，即形成很多小氣泡。由於局部壓力的轉換，壓力重新升高，氣泡崩潰。崩潰的氣泡產生一個振動波並傳送到液體中，形成剪切力使細胞破碎。
2． 粗分級
分離可用鹽析、等電點沉澱和有機溶劑分級分離等方法。這些方法的特點是簡便、處理量大，
3． 細分級
樣品的進一步純化。樣品經粗分離以後，一般體積較小，雜蛋白大部分已被除去。進一步純化，一般使用層析法包括凝膠過濾、離子交換層析、吸附層析以及親和層析等。必要時還可選擇電泳、等電聚焦等作為最後的純化步驟。
結晶是最後的一步
分離純化的方法：1．分子大小；2.溶解度；3.電荷；4.吸附性質；5.對配體分子的生物親和力等。
(一)根據分子大小不同的純化方法
1. 透析
利用蛋白質分子不能通過半透膜，使蛋白質和其它小分子物質如無機鹽、單糖等分開。
2. 密度梯度離心。
蛋白質顆粒的沉降系數不僅決定於它的大小，而且也取決於它的密度。
3. 凝膠過濾
利用蛋白質分子大小，因為凝膠過濾所用的介質是凝膠珠，其內部是多孔的網狀結構。當不同的分子大小的蛋白質分子流過凝膠層析柱時，比凝膠珠孔徑大的分子進入珠內的網狀結構，而被排阻在凝膠珠之外隨溶劑在凝膠珠之間的空隙向下移動並最先流出柱外，比網孔小的分子能不同程度底自由出入凝膠珠的內外，由於不同大小的分子所經路徑不同而得到分離。大分子先被洗脫下來。小分子後被洗脫
(二)利用溶解度差別的純化方法
1．等電點沉澱和PH的控制
蛋白質處於等電點時，其凈電荷為零，由於相鄰蛋白質分子之間沒有靜電斥力而聚集沉澱。因此在其他條件相同時，它的溶解度達到最底點，利用等電點分離蛋白質是一種常用的方法。
2. 蛋白質的鹽溶和鹽析
中性鹽可以增加蛋白質的溶解度，這種現象稱為鹽溶。鹽溶作用是由於蛋白質分子吸附某種鹽類離子後，帶電層使蛋白質分子彼此排斥，而蛋白質分子與水相互作用加強了，因而溶解度增加
當溶液的離子強度增加到一定數值時，蛋白質的溶解度開始下降。當離子強度足夠高時，很多蛋白質可以從水溶液中沉澱出來，這種現象稱為鹽析。
鹽析作用的主要原因是大量中性鹽的加入使水的活性降低，原來溶液的大部分甚至全部的自由基水轉變成鹽離子的水化水

❺ 生物學研究中常用的凝膠電泳有哪些

（1）瓊脂糖和聚丙烯醯胺凝膠電泳
瓊脂糖是一種線性多糖聚合物，是從紅色海藻產物瓊脂中提取而來的。當瓊脂糖溶液加熱到沸點後冷卻凝固便會形成良好的電泳介質，其密度是由瓊脂糖的濃度決定的。經過化學修飾的低熔點(LMP)的瓊脂糖，在結構上比較脆弱，因此在較低的溫度下便會熔化，可用於DNA片段的制備電泳。
聚丙烯醯胺凝膠主要有兩種方式:一是用於分離和純化雙鏈DNA片段的非變性聚丙烯醯胺凝膠。在未變凝膠中分離DNA的缺點是DNA的遷移率受鹼基組成和序列的影響。由於無法得知未知DNA的遷移是否反常，故不能用未變性的聚丙烯醯胺凝膠電泳確定雙鏈DNA的大小。二是用於分離及純化單鏈DNA片段的變性聚丙烯醯胺凝膠。這類聚丙烯醯胺凝膠是在核苷酸鹼基配對抑制劑(尿素或甲醯胺)的存在下聚合而成，變性DNA的移動速度同其鹼基組成及序列幾乎完全無關，故可用於分離及純化單鏈DNA片段和DNA測序等。
（2）脈沖電場凝膠電泳
普通的凝膠電泳技術顯然是無法分離如此超大分子量的DNA分子的。1984年，D.C.Schwartz和C.R.Cantor發明的脈沖電場凝膠電泳技術，可以成功地用來分離整條染色體這樣的超大分子量的DNA分子。在常規的瓊脂糖凝膠電泳中，超過一定大小范圍的所有的雙鏈DNA分子，都是按相同的速率遷移的。這是因為它們在單向恆定電場的作用下，僅以「一端向前」的方式游動穿過整個膠板。而在脈沖電場中，DNA分子的遷移方向是隨著所用的電場方向的周期性變化而不斷改變的。
在標準的PFGE中，頭一個脈沖的電場方向與核酸移動方向成45°夾角，而下一個脈沖的電場方向與核酸移動方向在另一側亦成45°夾角。由於加壓在瓊脂糖凝膠上的電場方向、電流大小及作用時間都在交替地變換著，這就使得DNA分子能夠隨時地調整其游動方向，以適應凝膠孔隙的無規則變化。與分子量較小的DNA分子相比，分子量較大的DNA分子需要更多的次數來更換其構型和方位，以使其可以按新的方向游動。因此，在瓊脂糖介質中的遷移速率也就顯得更慢一些，從而達到分離超大分子量DNA分子的目的。應用脈沖電場凝膠電泳技術，可成功地分離到分子量高達107bp的DNA大分子。

❻ 求蛋白分離純化步驟

蛋白質分離純化的一般程序可分為以下幾個步驟：
（一）材料的預處理及細胞破碎
分離提純某一種蛋白質時,首先要把蛋白質從組織或細胞中釋放出來並保持原來的天然狀態,不喪失活性.所以要採用適當的方法將組織和細胞破碎.常用的破碎組織細胞的方法有：
1.機械破碎法
這種方法是利用機械力的剪切作用,使細胞破碎.常用設備有,高速組織搗碎機、勻漿器、研缽等.
2.滲透破碎法
這種方法是在低滲條件使細胞溶脹而破碎.
3.反復凍融法
生物組織經凍結後,細胞內液結冰膨脹而使細胞脹破.這種方法簡單方便,但要注意那些對溫度變化敏感的蛋白質不宜採用此法.
4.超聲波法
使用超聲波震盪器使細胞膜上所受張力不均而使細胞破碎.
5.酶法
如用溶菌酶破壞微生物細胞等.
(二)蛋白質的抽提
通常選擇適當的緩沖液溶劑把蛋白質提取出來.抽提所用緩沖液的pH、離子強度、組成成分等條件的選擇應根據欲制備的蛋白質的性質而定.如膜蛋白的抽提,抽提緩沖液中一般要加入表面活性劑（十二烷基磺酸鈉、tritonX-100 等）,使膜結構破壞,利於蛋白質與膜分離.在抽提過程中,應注意溫度,避免劇烈攪拌等,以防止蛋白質的變性.
（三）蛋白質粗製品的獲得
選用適當的方法將所要的蛋白質與其它雜蛋白分離開來.比較方便的有效方法是根據蛋白質溶解度的差異進行的分離.常用的有下列幾種方法：
1.等電點沉澱法
不同蛋白質的等電點不同,可用等電點沉澱法使它們相互分離.
2.鹽析法
不同蛋白質鹽析所需要的鹽飽和度不同,所以可通過調節鹽濃度將目的蛋白沉澱析出.被鹽析沉澱下來的蛋白質仍保持其天然性質,並能再度溶解而不變性.
3.有機溶劑沉澱法
中性有機溶劑如乙醇、丙酮,它們的介電常數比水低.能使大多數球狀蛋白質在水溶液中的溶解度降低,進而從溶液中沉澱出來,因此可用來沉澱蛋白質.此外,有機溶劑會破壞蛋白質表面的水化層,促使蛋白質分子變得不穩定而析出.由於有機溶劑會使蛋白質變性,使用該法時,要注意在低溫下操作,選擇合適的有機溶劑濃度.
（四）樣品的進一步分離純化
用等電點沉澱法、鹽析法所得到的蛋白質一般含有其他蛋白質雜質,須進一步分離提純才能得到有一定純度的樣品.常用的純化方法有：凝膠過濾層析、離子交換纖維素層析、親和層析等等.
有時還需要這幾種方法聯合使用才能得到較高純度的蛋白質樣品.

❼ 細胞破碎後，用緩沖液提取蛋白質，用什麼方法能得到蛋

細胞破碎後，用緩沖液提取蛋白質，用什麼方法能得到蛋
蛋白質分離純化的一般程序可分為以下幾個步驟：

（一）材料的預處理及細胞破碎

分離提純某一種蛋白質時，首先要把蛋白質從組織或細胞中釋放出來並保持原來的天然狀態，不喪失活性。所以要採用適當的方法將組織和細胞破碎。常用的破碎組織細胞的方法有：

1. 機械破碎法

這種方法是利用機械力的剪切作用，使細胞破碎。常用設備有，高速組織搗碎機、勻漿器、研缽等。

2. 滲透破碎法

這種方法是在低滲條件使細胞溶脹而破碎。

3. 反復凍融法

生物組織經凍結後，細胞內液結冰膨脹而使細胞脹破。這種方法簡單方便，但要注意那些對溫度變化敏感的蛋白質不宜採用此法。

4. 超聲波法

使用超聲波震盪器使細胞膜上所受張力不均而使細胞破碎。

5. 酶法

如用溶菌酶破壞微生物細胞等。

(二) 蛋白質的抽提

通常選擇適當的緩沖液溶劑把蛋白質提取出來。抽提所用緩沖液的pH、離子強度、組成成分等條件的選擇應根據欲制備的蛋白質的性質而定。如膜蛋白的抽提，抽提緩沖液中一般要加入表面活性劑（十二烷基磺酸鈉、tritonX-100等），使膜結構破壞，利於蛋白質與膜分離。在抽提過程中，應注意溫度，避免劇烈攪拌等，以防止蛋白質的變性。

（三）蛋白質粗製品的獲得

選用適當的方法將所要的蛋白質與其它雜蛋白分離開來。比較方便的有效方法是根據蛋白質溶解度的差異進行的分離。常用的有下列幾種方法：

1. 等電點沉澱法

不同蛋白質的等電點不同，可用等電點沉澱法使它們相互分離。

2. 鹽析法

不同蛋白質鹽析所需要的鹽飽和度不同，所以可通過調節鹽濃度將目的蛋白沉澱析出。被鹽析沉澱下來的蛋白質仍保持其天然性質，並能再度溶解而不變性。

3. 有機溶劑沉澱法

中性有機溶劑如乙醇、丙酮，它們的介電常數比水低。能使大多數球狀蛋白質在水溶液中的溶解度降低，進而從溶液中沉澱出來，因此可用來沉澱蛋白質。此外，有機溶劑會破壞蛋白質表面的水化層，促使蛋白質分子變得不穩定而析出。由於有機溶劑會使蛋白質變性，使用該法時，要注意在低溫下操作，選擇合適的有機溶劑濃度。

（四）樣品的進一步分離純化

用等電點沉澱法、鹽析法所得到的蛋白質一般含有其他蛋白質雜質，須進一步分離提純才能得到有一定純度的樣品。常用的純化方法有：凝膠過濾層析、離子交換纖維素層析、親和層析等等。有時還需要這幾種方法聯合使用才能得到較高純度的蛋白質樣品。

❽ 蛋白純化層析 hcp除去要求是多少

蛋白純化方法很多,也很復雜,一般程序如下：分離純化某一特定蛋白質的一般程序可以分為前處理、粗分級、細分級三步. 前處理分離純化某種蛋白質,首先要把蛋白質從原來的組織或細胞中以溶解的狀態釋放出來並保持原來的天然狀態,不丟失生物活性.為此,動物材料應先剔除結締組織和脂肪組織,種子材料應先去殼甚至去種皮以免受單寧等物質的污染,油料種子最好先用低沸點的有機溶劑如乙醚等脫脂.然後根據不同的情況,選擇適當的方法,將組織和細胞破碎.動物組織和細胞可用電動搗碎機或勻漿機破碎或用超聲波處理破碎.植物組織和細胞由於具有纖維素、半纖維素和果膠等物質組成的細胞壁,一般需要用石英砂或玻璃粉和適當的提取液一起研磨的方法或用纖維素酶處理也能達到目的.細菌細胞的破碎比較麻煩,因為整個細菌細胞壁的骨架實際上是一個借共價鍵連接而成的肽聚糖囊狀大分子,非常堅韌.破碎細菌細胞壁的常用方法有超聲波破碎,與砂研磨、高壓擠壓或溶菌酶處理等.組織和細胞破碎後,選擇適當的緩沖液把所要的蛋白提取出來.細胞碎片等不溶物用離心或過濾的方法除去. 如果所要的蛋白主要集中在某一細胞組分,如細胞核、染色體、核糖體或可溶性細胞質等,則可利用差速離心的方法將它們分開,收集該細胞組分作為下步純化的材料.如果碰上所要蛋白是與細胞膜或膜質細胞器結合的,則必須利用超聲波或去污劑使膜結構解聚,然後用適當介質提取. 粗分級分離當蛋白質提取液（有時還雜有核酸、多糖之類）獲得後,選用一套適當的方法,將所要的蛋白與其他雜蛋白分離開來.一般這一步的分離用鹽析、等電點沉澱和有機溶劑分級分離等方法.這些方法的特點是簡便、處理量大,既能除去大量雜質,又能濃縮蛋白溶液.有些蛋白提取液體積較大,又不適於用沉澱或鹽析法濃縮,則可採用超過濾、凝膠過濾、冷凍真空乾燥或其他方法進行濃縮. 細分級分離樣品經粗分級分離以後,一般體積較小,雜蛋白大部分已被除去.進一步純化,一般使用層析法包括凝膠過濾、離子交換層析、吸附層析以及親和層析等.必要時還可選擇電泳法,包括區帶電泳、等電點聚焦等作為最後的純化步驟.用於細分級分離的方法一般規模較小,但解析度很高. 結晶是蛋白質分離純化的最後步驟.盡管結晶過程並不能保證蛋白一定是均一的,但是只有某種蛋白在溶液中數量上佔有優勢時才能形成結晶.結晶過程本身也伴隨著一定程度的純化,而重結晶又可除去少量夾雜的蛋白.由於結晶過程中從未發現過變性蛋白,因此蛋白的結晶不僅是純度的一個標志,也是斷定製品處於天然狀態的有力指標.

❾ 凝膠過濾分離蛋白質實驗圖中若只出現一個峰的原因是什麼還有出現前面的峰小於後面的峰又是為什麼

您好！凝膠過濾分離蛋白質實驗圖中若只出現一個峰的原因：
① 蛋白純度很好：）這個可能性不大。
② 選用的分子篩顆粒尺寸不對，或者太大或者太小，太大的話，所有蛋白都在內水體積出，太小的話，所有蛋白都在外水出了。
③ 分子篩凝膠因為壓力太大等原因，顆粒破碎了。。。
出現前面的峰小於後面的峰：
① 如果出現兩個以上峰，至少說明它有一定的分離效果啦。
② 說明選用的這個凝膠對於待純化蛋白溶液來說，進入外水體積的蛋白就是顆粒較大蛋白含量少，進入內水體積的蛋白就是顆粒較小蛋白含量少。具體的根據電泳結果來判斷，看你的目的蛋白在哪一段，是否還能優化分子篩孔徑。

網路教育團隊【海納百川團】為您解答。
感謝您的採納，O(∩_∩)O 如有疑問，歡迎追問。