離子交換液相色譜柱沖洗

『壹』 如何反向沖洗液相色譜柱

轉載」《分析測試網路網》實用資料！色譜柱沖洗一點意見！！

主要針對的反向色譜柱而講！

1.色譜柱簡介

最常用的色譜柱填充劑為化學鍵合硅膠。反相色譜系統使用非極性添充劑，以十八烷基硅烷鍵合硅膠最為常用，辛基硅烷鍵合硅膠和其他類型的硅烷鍵合硅膠(如氰基硅烷鍵合相和氨基硅烷鍵合相等)也有使用,正相色譜系統使用極性填充劑，常用的填充劑有硅膠等。離子交換填充劑用於離子交換色譜;凝膠或高分子多孔微球等填充劑用於分子排阻色譜;手性鍵合填充劑用於對映異構體的拆分分析。

填充劑的性能(如載體的形狀、粒徑、孔徑、表面積、鍵合基團的表面覆蓋度、含炭量和鍵合類型等)以及色譜柱的填充，直接影響待測物的保留行為和分離效果。孔徑在15nm(1nm=10埃)以下的填料適合於分析分子量小於 2000的化合物，分子量大於2000的化合物則應選擇孔徑在30nm以上的填料。以硅膠為載體的一般鍵合固定相填充劑適用PH2~8的流動相。當PH大於8時，可使載體硅膠溶解;當PH小於2時，與硅膠相連的化學鍵合相易水解脫落。當色譜系統中需使用PH大於8的流動相時，應選用耐鹼的填充劑，如採用高純硅膠為載體並具有高表面覆蓋度的鍵合硅膠、包裹聚合物填充劑、有機-無機雜化填充劑或非硅膠填充劑等;當需使用PH小於2的流動相時，應選用耐酸的填充劑，如具有大體積側鏈能產生空間位阻保護作用的二異丙基或二異丁基取代十八烷基硅烷鍵合硅膠、有機-無機雜化填充劑等。

2.色譜柱的沖洗體積確定

一般情況都是沖洗色譜柱10-20倍柱體積，具體可以這樣計算，根據柱內徑和柱長算出色譜柱內體積。短柱一般時間就是30分鍾、長柱一般沖洗60分鍾就可以了。舉例：內經為4.6mm、長250mm，其柱內體積=3.14*4.6*4.6/4*250=4.153毫升，流速是1.0毫升每分鍾，折中取15被柱內體積，則沖洗時間就出來了。

3.色譜柱沖洗

沖洗色譜柱最好在分析結束後，用流動相沖洗到基線平穩，然後用10%左右的有機溶劑沖洗色譜柱，主要是沖洗干凈流動相中的緩沖鹽。然後用100有機溶劑沖洗。最好是梯度變化沖洗。分析物可能為一些能溶解在水中，有些需要用純溶劑才能完全去除。如果分析時間緊迫一定要把鹽分沖洗干凈，一般情況不要用純水沖洗色譜柱，特別是反向柱的填料的鍵合集團容易折斷，對色譜柱造成損傷。色譜柱被使用在某種程度上就是開始被污染了，所以色譜柱的壽命和我們使用的情況有很大的關系。雖然被污染但是對我們分析目標物沒有造成影響我們也就是認為還能用。

4.色譜柱維護沖洗

常見故障篩板阻塞，解決辦法是：a、過濾流動相;b、過濾樣品;c、運用在線過濾或保護柱。

柱頭塌陷解決方法是：：a、避免使用PH>8的流動相(針對大部分硅膠的柱子);b、使用保護柱 ;c、使用預柱(飽和色譜柱)。

前面談到的不管用什麼溶劑一定要加入一定比例的用機溶劑，主要是考慮到一些疏水基團在有機溶劑裡面容易伸展利於沖洗其包藏的雜質等。當我們的色譜柱在壓力和柱效下降時，我可以拆開泵近端柱頭的螺絲取出篩板，清洗篩板以及觀察裡面的填料，如填料污染嚴重，就要進行挖取一部分被污染的填料然後用其他廢棄的柱子相同填料來填補，用新的篩板或清洗好的篩板擰好螺絲。然後沖洗觀察柱壓變化和測試柱效等。

5.特殊沖洗
強保留物質和大分子化合物在色譜柱中累積，對樣品中的化合物產生額外的保留行為，不僅引起峰形變寬、拖尾，使柱效下降，同時也會引起保留時間的變化，累積到一定程度時還會導致柱壓升高。由於強保留物質和大分子化合物對色譜分離的影響是一個累積效應，需要一定的時間才會體現出來，但對許多樣品特別是復雜樣品而言，很難判斷其是否含有強保留物質，因此要防止強保留物質的累積，需要在每天的日常維護中用純甲醇或乙腈清洗色譜柱。

清洗方法：

1.未使用緩沖鹽：每天分析完成後，用純甲醇或純乙腈反向沖洗色譜柱60min。

2. 使用過緩沖鹽：分析完成後，先用上述方法除去緩沖鹽，然後再用純甲醇或乙腈反向沖洗色譜柱 60min。

3.補救方法：

水——乙腈——氯仿(或異丙醇)——乙腈——水

每一步以 1.0ml/min 流速反向沖洗色譜柱 60min。

希望大家提出更好的建議和辦法。

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『貳』 液相色譜法實驗前為什麼要沖洗色譜柱

1.色譜柱簡介
最常用的色譜柱填充劑為化學鍵合硅膠。反相色譜系統使用非極性添充劑，以十八烷基硅烷鍵合硅膠最為常用，辛基硅烷鍵合硅膠和其他類型的硅烷鍵合硅膠（如氰基硅烷鍵合相和氨基硅烷鍵合相等）也有使用,正相色譜系統使用極性填充劑，常用的填充劑有硅膠等。離子交換填充劑用於離子交換色譜；凝膠或高分子多孔微球等填充劑用於分子排阻色譜；手性鍵合填充劑用於對映異構體的拆分分析。
填充劑的性能（如載體的形狀、粒徑、孔徑、表面積、鍵合基團的表面覆蓋度、含炭量和鍵合類型等）以及色譜柱的填充，直接影響待測物的保留行為和分離效果。孔徑在15nm（1nm=10埃）以下的填料適合於分析分子量小於2000的化合物，分子量大於2000的化合物則應選擇孔徑在30nm以上的填料。以硅膠為載體的一般鍵合固定相填充劑適用PH2~8的流動相。當PH大於8時，可使載體硅膠溶解；當PH小於2時，與硅膠相連的化學鍵合相易水解脫落。當色譜系統中需使用PH大於8的流動相時，應選用耐鹼的填充劑，如採用高純硅膠為載體並具有高表面覆蓋度的鍵合硅膠、包裹聚合物填充劑、有機-無機雜化填充劑或非硅膠填充劑等；當需使用PH小於2的流動相時，應選用耐酸的填充劑，如具有大體積側鏈能產生空間位阻保護作用的二異丙基或二異丁基取代十八烷基硅烷鍵合硅膠、有機-無機雜化填充劑等。
2.色譜柱的沖洗體積確定
一般情況都是沖洗色譜柱10-20倍柱體積，具體可以這樣計算，根據柱內徑和柱長算出色譜柱內體積。短柱一般時間就是30分鍾、長柱一般沖洗60分鍾就可以了。舉例：內經為4.6mm、長250mm，其柱內體積=3.14*4.6*4.6/4*250=4.153毫升，流速是1.0毫升每分鍾，折中取15被柱內體積，則沖洗時間就出來了。
3.色譜柱沖洗
沖洗色譜柱最好在分析結束後，用流動相沖洗到基線平穩，然後用10%左右的有機溶劑沖洗色譜柱，主要是沖洗干凈流動相中的緩沖鹽。然後用100有機溶劑沖洗。最好是梯度變化沖洗。分析物可能為一些能溶解在水中，有些需要用純溶劑才能完全去除。如果分析時間緊迫一定要把鹽分沖洗干凈，一般情況不要用純水沖洗色譜柱，特別是反向柱的填料的鍵合集團容易折斷，對色譜柱造成損傷。色譜柱被使用在某種程度上就是開始被污染了，所以色譜柱的壽命和我們使用的情況有很大的關系。雖然被污染但是對我們分析目標物沒有造成影響我們也就是認為還能用。
4.色譜柱維護沖洗
常見故障篩板阻塞，解決辦法是：a、過濾流動相；b、過濾樣品；c、運用在線過濾或保護柱。
柱頭塌陷解決方法是：：a、避免使用PH>8的流動相（針對大部分硅膠的柱子）；b、使用保護柱 ；c、使用預柱（飽和色譜柱）。
前面談到的不管用什麼溶劑一定要加入一定比例的用機溶劑，主要是考慮到一些疏水基團在有機溶劑裡面容易伸展利於沖洗其包藏的雜質等。當我們的色譜柱在壓力和柱效下降時，我可以拆開泵近端柱頭的螺絲取出篩板，清洗篩板以及觀察裡面的填料，如填料污染嚴重，就要進行挖取一部分被污染的填料然後用其他廢棄的柱子相同填料來填補，用新的篩板或清洗好的篩板擰好螺絲。然後沖洗觀察柱壓變化和測試柱效等。

5.特殊沖洗 強保留物質和大分子化合物在色譜柱中累積，對樣品中的化合物產生額外的保留行為，不僅引起峰形變寬、拖尾，使柱效下降，同時也會引起保留時間的變化，累積到一定程度時還會導致柱壓升高。由於強保留物質和大分子化合物對色譜分離的影響是一個累積效應，需要一定的時間才會體現出來，但對許多樣品特別是復雜樣品而言，很難判斷其是否含有強保留物質，因此要防止強保留物質的累積，需要在每天的日常維護中用純甲醇或乙腈清洗色譜柱。
清洗方法：
1.未使用緩沖鹽：每天分析完成後，用純甲醇或純乙腈反向沖洗色譜柱60min。
2. 使用過緩沖鹽：分析完成後，先用上述方法除去緩沖鹽，然後再用純甲醇或乙腈反向沖洗色譜柱 60min。
3.補救方法：
水——乙腈——氯仿（或異丙醇）——乙腈——水
每一步以 1.0ml/min 流速反向沖洗色譜柱 60min。

『叄』 液相色譜柱應該怎樣清洗

朋友，什麼柱子規格，新柱舊柱？

正相or反相？

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『肆』 高效液相色譜在使用前怎麼沖洗系統和色譜柱

高效液相色譜在使用前怎麼沖洗系統和色譜柱
前提條件是使用的反相色譜柱（C8、C18及其衍生等）,不知道你用的什麼柱子
1、一般使用前用80%的甲醇沖洗20倍（推薦值）柱體積,應考慮柱前儀器的死體積（約5-10ml）,可以不接柱子大流速3-5ml/min,沖3-5分鍾,然後更換流動相即可.
2、使用後用可用80%甲醇沖洗保存,如果長期不使用,建議用純甲醇或乙腈保存.
原則上是根據流動相組分不要在柱子中產生難溶有機鹽類.

『伍』 液相色譜C18柱堵塞後如何沖洗柱子，能用純水 沖柱子嗎

C18柱子不能用純水沖洗，再說本來就堵了，壓力很高應該選擇壓力低的溶劑。內
如果你確定是堵塞了容，就用純乙腈反沖，先用低一點的流速，比如01ml/min，看壓力情況，不要超過200bar，再慢慢提高流速，但不要超過1.的流速，如果是真的堵了，可能會壓力慢慢降下來的。
如果上面方法不行，那還有可能是鹽析堵的，那就用乙腈：水=90：10反沖。

『陸』 液相色譜在分析化合物時,為什麼實驗前要沖洗色譜柱

液相色譜在分析化合物時，實驗前要沖洗色譜柱是為了去除誤差。液相色譜以液體作為流動相，固定相可以有多種形式，如紙、薄板和填充床等。在色譜技術發展的過程中。為了區分各種方法，根據固定相的形式產生了各自的命名，如紙色譜、薄層色譜和柱液相色譜。

經典液相色譜的流動相是依靠重力緩慢地流過色譜柱，因此固定相的粒度不可能太小(100μm～150μm左右)。分離後的樣品是被分級收集後再進行分析的，使得經典液相色譜不僅分離效率低、分析速度慢，而且操作也比較復雜。

直到20世紀60年代，發展出粒度小於10μm的高效固定相，並使用了高壓輸液泵和自動記錄的檢測器，克服了經典液相色譜的缺點，發展成高效液相色譜。

(6)離子交換液相色譜柱沖洗擴展閱讀

液相色譜能完成難度較高的分離工作：

a.氣相色譜的流動相載氣是色譜惰性的，基本不參與分配平衡過程，與樣品分子無親和作用，樣品分子主要與固定相相互作用。而在液相色譜中流動相液體也與固定相爭奪樣品分子，為提高選擇性增加了一個因素。也可選擇不同比例的兩種或兩種以上的液體做流動相，增加分離的選擇性。

b.液相色譜固定相類型多，如離子交換色譜和排阻色譜等，作為分析時，選擇餘地大；而氣相色譜並不可能。

c.液相色譜通常在室溫下操作，較低的溫度，一般有利於色譜分離條件的選擇。

『柒』 每次使用之後的高效液相色譜柱都要清洗嗎，如何沖洗

這個是不是需要清洗的問題，需要看你的流動相是什麼。
一般反相色譜，經常會用到緩沖鹽。而鹽對於色譜柱傷害比較大。如果鹽堵在色譜柱裡面那柱子就廢了。所以需要把它沖掉。最好是每次都沖掉。
如果你的柱子流動相裡面沒有鹽，那就沒必要沖洗了。

沖洗方法：反相柱子最好保存在純甲醇或者純乙腈裡面，但是鹽不溶於純有機相。所以中間過渡甲醇水或者乙腈水。
究竟用什麼，要看你的流動相。
比如，我用的是磷酸鹽緩沖液-乙腈（70：30）的流動相，那麼沖洗的時候最好選用10%-15%乙腈水，沖洗1.0ml/min，至少30min，最好40min。

如果第二天接著使用的話可以不必用純甲醇或者純乙腈封存了。如果第二天不用，最好用純的有機相封上柱子，同樣是1.0ml/min流速沖洗30min。

另，也不是說不清洗就會壞。我們研發有的時候為了趕項目，來不及沖洗色譜柱。柱子不會怎麼樣。就是壽命會短一點而已。

『捌』 誰能幫幫我，高效液相色譜儀的柱子堵了，怎麼沖洗謝謝了

是怎麼被堵的？如果是鹽析被堵，可以用95% 的水低流速沖， 沖洗的時候可以將柱版溫略微設高一點，有利於權鹽溶解，或是先用100%水沖（只能短時間沖，二三十分鍾，時間長會損壞柱子），再用含有機相的水沖。如果是長時間走樣，樣品中的固體小顆粒堵了柱子，也只能反沖了。有些柱子反沖之後就只能倒過來用了，所以需謹慎，最好打電話咨詢下工程師（最好平時使用時加上保護柱，相對於色譜柱，濾芯還是便宜很多的）。