超濾管超濾時要稀釋多少倍
『壹』 15ml，10kd超濾管轉速要多大
1、選擇合適的超濾管，主要考慮MWCO和濃縮體積，最常見的是Ultra-15（10kD）。
通常應截留分子量不應大於目內的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量為35kDa，就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。
若目的蛋白分子量為10kD左右，則可以用截留分子量3kD的超濾管。認真閱讀使用說明書，注意超濾膜對各種化學物質的耐受程度有所不同，表格中有。
2、新買來的超濾是乾燥的，容使用前加入MilliQ水，水量完全過膜，冰浴或冰箱里預冷幾分鍾。然後將水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超過管頂的白線為准。操作要輕，加入蛋白液前，超濾管需要插在冰上預冷。
3、平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快，否則直接損壞超濾膜。
注意，一定要等離心機達到目的轉速之後，方可離開
離心機，否則離心機出問題時，無法第一時間處理，後果不可預測！膜與轉軸的方向根據說明書調整（角轉離心機的情況是膜與軸垂直）。在實際使用中，一般轉速開的比說明書里的要低，這樣可以延長離心管的使用壽命。
『貳』 求助：第一次使用超濾離心管應該怎麼處理
可能不同廠家的產品保存運輸條件不一樣。
如果有甘油等保護劑，那就一定要洗干凈再加版樣品。
乾的超權濾管也要先潤濕再用，否則可能不能完全利用膜面積。
最好，用樣品buffer潤洗下再加樣，最大程度保證蛋白活性。尤其是用過後保存在NaOH或乙醇中後。
一般還是離心機甩一下好，使膜充分浸潤。
降低吸附的辦法有：
1，蛋白濃度不要過低
2，盡量選用纖維素的低吸附超濾管
3，用前可以用Tween 80等去垢劑潤洗（不影響蛋白活性的前提下）
4，加入保護蛋白，如BSA(不影響蛋白後續使用的前提下)
用完保存在20% EtOH中，4C保存，防止長菌，依不同樣品可以重復使用不同的次數。
1.超濾膜（UF）：過濾精度在0.001-0.1微米。是一種利用壓差的膜法分離技術，可濾除水中的鐵銹、泥沙、懸浮物、膠體、細菌、大分子有機物等有害物質，並能保留對人體有益的一些礦物質元素。是礦泉水、山泉水生產工藝中的核心部件。超濾工藝中水的回收率高達95%以上，並且可方便的實現沖洗與反沖洗，不易堵塞，使用壽命相對較長。
2.微濾(MF)：過濾精度一般在0.1-50微米，常見的各種PP濾芯，活性碳濾芯，陶瓷濾芯等都屬於微濾范疇，用於簡單的粗過濾，過濾水中的泥沙、鐵銹等大顆粒雜質，但不能去除水中的細菌等有害物質。濾芯通常不能清洗，為一次性過濾材料，需要經常更換。① PP棉芯：一般只用於要求不高的粗濾，去除水中泥沙、鐵銹等大顆粒物質。② 活性碳：可以消除水中的異色和異味，但是不能去除水中的細菌，對泥沙、鐵銹的去除效果也很差。③ 陶瓷濾芯：最小過濾精度也只0.1微米，通常流量小，不易清洗。
3.納濾(NF)：過濾精度介於超濾和反滲透之間，脫鹽率比反滲透低，也是一種需要加電、加壓的膜法分離技術，水的回收率較低。也就是說用納濾膜制水的過程中，一定會浪費將近30%的自來水。這是一般家庭不能接受的。一般用於工業純水製造。
4.反滲透(RO)：過濾精度為0.0001微米左右，可濾除水中的幾乎一切的雜質(包括有害的和有益的)，只能允許水分子通過。一般用於純凈水、工業超純水、醫葯超純水的製造。反滲透技術需要加壓、加電，流量小，水的利用率低，不適合大量生活飲用水的凈化。
『肆』 millipore 超濾管區別
1、裝量：0.5ML 4ML 15ML
2、截留分子量3K 10K 30K 50K 100K
『伍』 做超濾實驗時，超濾膜上標的10KD、30KD單位如何對應分子的大小是否單位越大，超濾得到的物質分子越小
首先與超濾膜的抄材質有關，比襲如聚醚碸的和再生纖維的，同樣是10KD的，截流能力是不相同的，一般要求在截流分析量的2倍-5倍以上方可實現良好的分離，同時不同公司的超濾膜本身應該有自己的說明的，參照說明要求即可。
『陸』 超濾濃縮離心管使用前要怎麼處理
可能不同廠家的產品保存運輸條件不一樣。
如果有甘油等保護劑，那就一定要洗干凈內再加樣容品。
乾的超濾管也要先潤濕再用，否則可能不能完全利用膜面積。
最好，用樣品buffer潤洗下再加樣，最大程度保證蛋白活性。尤其是用過後保存在NaOH或乙醇中後。
一般還是離心機甩一下好，使膜充分浸潤。
降低吸附的辦法有：
1，蛋白濃度不要過低
2，盡量選用纖維素的低吸附超濾管
3，用前可以用Tween 80等去垢劑潤洗（不影響蛋白活性的前提下）
4，加入保護蛋白，如BSA(不影響蛋白後續使用的前提下)
用完保存在20% EtOH中，4C保存，防止長菌，依不同樣品可以重復使用不同的次數。
『柒』 用超濾離心法測包封率脂質體需不需要稀釋
超濾離心前應該可以根據需要進行稀釋，也可以不稀釋。
超濾離心後，如果是取收內集的離心液進行檢測容的話，建議取離心液進行定量稀釋，比如到固定體積的量瓶中，以便根據稀釋倍數確定離心液中的葯物濃度從而計算包封率。
『捌』 超濾離心管怎麼使用
蛋白濃縮和換Buffer通常使用的超濾管，常用Millipore的Amicon-Ultra-15超濾管（MWCO10kD）。也有其它型號的、不同體積大小和MWCO超濾管可選，視目的蛋白的分子量與濃縮前體積、濃縮目標體積而定。可重復使用。
1、選擇合適的超濾管，主要考慮MWCO和濃縮體積，通常應截留分子量不應大於目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量為35kDa，就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右，則可以用截留分子量3kD的超濾管。
2、新買來的超濾是乾燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全過膜，冰浴或冰箱里預冷幾分鍾。然後將水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超過管頂的白線為准。操作要輕，加入蛋白液前，超濾管需要插在冰上預冷。
3、平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快，否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾（離心機預冷至4度）。膜與轉軸的方向根據說明書調整（角轉離心機的情況是膜與軸垂直）。在實際使用中，一般轉速開的比說明書里的要低，這樣可以延長離心管的使用壽命。
4、當濃縮到剩下1ml時，【取50ul國產Bradford溶液，加入10ul流穿，看有沒變藍色，以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了，將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管，用5mg/ml的BSA離心10min，再取流穿，跑蛋白膠或Bradford粗測】，繼續加入剩下的蛋白液濃縮（在冰上操作，防止蛋白受熱），直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發生蛋白沉澱，導致堵管。若發生沉澱，要確定沉澱的具體原因，是蛋白濃度過高還是Buffer不合適；前者可用多根超濾管同時超濾，降低濃度的辦法解決，後者的方法是換不同的Buffer，直到蛋白不發生沉澱為止。
5、前面幾步用以濃縮蛋白，如果要換Buffer，在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候，輕輕加入新的Buffer（經0.22um超濾膜超濾），再濃縮至1ml左右，連續三次，最後一次的濃縮終體積根據需要的蛋白濃度而定，一般不多於500ul，也有濃縮至200ul以內的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算，三次達到1000倍以上，基本上可以達到換buffer的目的。
6、取出最終蛋白濃縮液的操作在冰上操作，用黃槍頭（200ul）取，輕輕順著邊緣插入槍頭，輕輕吹打、混勻蛋白液，注意不要碰到超濾膜，然後吸取濃縮液，每次吸接近200ul，直到吸完。管底剩下的最後一點濃縮液不必吸取，否則難度太大，有可能損壞超濾膜。最後加入MilliQ水到超濾管中，沒過超濾膜，防止膜失水變干。
7、以下是處理超濾管，重復利用超濾管的步驟。
8、倒出超濾管里的水，用milliQ水輕輕潤洗幾次，【若管底有可見的蛋白沉澱，可以先加入水，然後用槍頭吹打，注意不要碰到膜，吹打至沉澱懸起，然後倒掉，不可用自來水猛沖】然後加入0.2M的NaOH溶液，室溫放置20min，期間平衡超濾管。再離心10min。倒出殘留的NaOH溶液，將管芯浸入MilliQ水的燒杯(1或2L)中,放置幾個小時,再換新的水,放置幾個小時，不斷稀釋NaOH濃度。50ml管和蓋子用自來水洗，內壁再用MilliQ水洗干凈。
9、取出浸沒的管芯，加至接近滿的MilliQ水，50ml管也加滿MilliQ水，將管芯慢慢放入50ml
離心管，排出部分水，然後蓋上蓋子，放4度保存，直到下次使用。一般來說，按照上述步驟和注意事項，每根管用三四年不會壞。