超濾離心機離心時間
⑴ 80-2離心機 離心多久時間,轉速多少
g是重力加速度(9.80665m/s#178;),rpm(轉/分)是轉速單位,一般用n表示轉速,並不能直接轉換。
可以通過轉速及其他參數算出離心力,然後計算出離心力相對於重力加速度的倍數,記為相對離心力 Relative centrifugal force (RCF)
通過公式換算如下:
RCF=Flt;離心力;/Glt;重力;= mrω#178;/mg=rω#178;/g=r*(2π*n)#178;/g lt;注意:此處轉速n應採用rps(轉/秒)作為單位;
也可以記錄為:Flt;離心力;是(RCF數值)個g的大小。
⑵ 超濾離心管怎麼使用
蛋白濃縮和換Buffer通常使用的超濾管,常用Millipore的Amicon-Ultra-15超濾管(MWCO10kD)。也有其它型號的、不同體積大小和MWCO超濾管可選,視目的蛋白的分子量與濃縮前體積、濃縮目標體積而定。可重復使用。
1、選擇合適的超濾管,主要考慮MWCO和濃縮體積,通常應截留分子量不應大於目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管。
2、新買來的超濾是乾燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全過膜,冰浴或冰箱里預冷幾分鍾。然後將水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超過管頂的白線為准。操作要輕,加入蛋白液前,超濾管需要插在冰上預冷。
3、平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快,否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾(離心機預冷至4度)。膜與轉軸的方向根據說明書調整(角轉離心機的情況是膜與軸垂直)。在實際使用中,一般轉速開的比說明書里的要低,這樣可以延長離心管的使用壽命。
4、當濃縮到剩下1ml時,【取50ul國產Bradford溶液,加入10ul流穿,看有沒變藍色,以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了,將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管,用5mg/ml的BSA離心10min,再取流穿,跑蛋白膠或Bradford粗測】,繼續加入剩下的蛋白液濃縮(在冰上操作,防止蛋白受熱),直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發生蛋白沉澱,導致堵管。若發生沉澱,要確定沉澱的具體原因,是蛋白濃度過高還是Buffer不合適;前者可用多根超濾管同時超濾,降低濃度的辦法解決,後者的方法是換不同的Buffer,直到蛋白不發生沉澱為止。
5、前面幾步用以濃縮蛋白,如果要換Buffer,在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候,輕輕加入新的Buffer(經0.22um超濾膜超濾),再濃縮至1ml左右,連續三次,最後一次的濃縮終體積根據需要的蛋白濃度而定,一般不多於500ul,也有濃縮至200ul以內的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算,三次達到1000倍以上,基本上可以達到換buffer的目的。
6、取出最終蛋白濃縮液的操作在冰上操作,用黃槍頭(200ul)取,輕輕順著邊緣插入槍頭,輕輕吹打、混勻蛋白液,注意不要碰到超濾膜,然後吸取濃縮液,每次吸接近200ul,直到吸完。管底剩下的最後一點濃縮液不必吸取,否則難度太大,有可能損壞超濾膜。最後加入MilliQ水到超濾管中,沒過超濾膜,防止膜失水變干。
7、以下是處理超濾管,重復利用超濾管的步驟。
8、倒出超濾管里的水,用milliQ水輕輕潤洗幾次,【若管底有可見的蛋白沉澱,可以先加入水,然後用槍頭吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉澱懸起,然後倒掉,不可用自來水猛沖】然後加入0.2M的NaOH溶液,室溫放置20min,期間平衡超濾管。再離心10min。倒出殘留的NaOH溶液,將管芯浸入MilliQ水的燒杯(1或2L)中,放置幾個小時,再換新的水,放置幾個小時,不斷稀釋NaOH濃度。50ml管和蓋子用自來水洗,內壁再用MilliQ水洗干凈。
9、取出浸沒的管芯,加至接近滿的MilliQ水,50ml管也加滿MilliQ水,將管芯慢慢放入50ml
離心管,排出部分水,然後蓋上蓋子,放4度保存,直到下次使用。一般來說,按照上述步驟和注意事項,每根管用三四年不會壞。
⑶ 台式離心機離心時間越長離心效果越好嗎
台式離心機作為分離率極高的沉降設備,具有運行穩定、生產能力強、工作效率高、易於維修保養等特點,降低了企業經營風險,因此受到了各行各業的歡迎。但要選擇一款適合自己的離心機還是需要一定的經驗!
台式離心機通過轉頭繞軸高速旋轉所產生的強大離心力,根據不同物質在離心場中沉降速度的差異,使樣品中不同性質的物質分離,以滿足科研人員對實驗樣品的分析、分離要求。台式離心機的分離效果與很多因素有關,不可否認離心力和離心時間這兩個是非常重要的。一般來講,離心力越大,則離心效果越好。而在離心時間上,則是離心時間越長,離心效果越好。不過,需要知道的是,同等離心力下,當離心時間達到某些數值後,離心效果不會再提升,則是會保持不變。
⑷ 離心管和離心超濾管
離心管就是一個簡單的可以承受高轉速壓力的管子,比如離一些樣品,分離出上版清沉澱。
離心超濾管會權有一個類似於內管和外管的兩個部分,內管中是帶有一定分子量的膜,當高速離心時,分子量比它小的就漏到下面的管子(即外管)中了,分子量比它大的就截留在上面(即內管中),就是超濾的原理。。。。常用於濃縮樣品。
⑸ 離心機離心時間對分離效果的影響大嗎
實驗室離心機的離心時間對分離效果的影響
對於離心機的分離效果,我們常常會考慮離心機種類,離心方法,離心介質等因素,但是在實際操作中,除了以上幾點,離心機轉速和離心時間以及離心介質的PH值和溫度等條件也是很重要的,下面就為大家詳細介紹一下後面三種因素對於分離效果的影響。
1、離心時間
實驗室離心機的離心時間是影響離心效果十分重要的一個因素,離心方法的不同所需要的離心時間也會不同。下面以差速離心和等密度梯度離心以及密度梯度離心為例,詳細介紹。對於差速離心來說,離心時間指的是某種顆粒完全沉降到離心管底的時間;而對於等密度梯度離心來說,離心時間則是指顆粒完全到達等密度點的平衡時間;zui後一個密度梯度離心的離心時間指的是形成界限分明的區帶的時間。對於後面兩種離心方法,其所需的區帶形成時間或平衡時間,影響因素很復雜,可通過試驗後確定。
2、離心轉速
離心機的轉速的大小主要由轉子的轉速和顆粒的旋轉半徑來決定,在說明離心條件時,往往也用相對離心力場來表示。實際工作中,離心力場的數據是指其平均值。即是指在離心溶液中點處顆粒所受的離心力場。
3、離心介質的PH值和溫度
離心介質的PH值的設定一般是處於酶穩定的PH范圍內,可採用緩沖液,在試驗過稱重,要避免過酸或者過鹼的環境對離心機本身產生腐蝕作用。
在實驗室離心機工作時,除了要格外注意對離心介質的選擇之外,還要控制好溫度及介質溶液的PH值等離心條件,防止其分離物質的凝集、變性和失活。一般來說,我們將離心溫度會控制在4℃左右,對於某些熱穩定性較好的酶等,離心也可在室溫下進行。
離心機
⑹ 超濾離心管是什麼
離心超濾管是一種採用優化過濾結構的設計方式,減少濃差極化,降低了膜易污染堵塞機率,加快了離心速度,縮短了離心所需的時間;超濾離心管還可用的膜表面面積提供快速樣品處理。
⑺ 超濾離心管放一般的離心機能用么
般的離心機有兩種轉子,一種是吊籃式的轉子,一種是角轉子.當然兩種都可以用來轉超濾管濃縮,不過角轉子效率會差很多,就是你離心時間長但濃縮體積還是不大.吊籃轉子效率比較高一些.
⑻ 離心的轉速和時間怎麼決定
離心分離的效果除了與離心機種類、離心方法、離心介質及密度梯度等因素有關以外,實際操作時,主離心機轉速和離心時間的確定、離心介質的PH值和溫度等條件也至關重要。
(一)離心機的轉速
離心加速度的大小取決於轉子的轉速和顆粒的旋轉半徑。在說明離心條件時,往往也用相對離心力場來表示。實際工作中,離心力場的數據是指其平均值。即是指在離心溶液中點處顆粒所受的離心力場。
(二)離心時間
離心時間依據離心方法的不同而有所差別。對於差速離心來說,是指某種顆粒完全沉降到離心管底的時間;對等密度梯度離心而言,離心時間是指顆粒完全到達等密度點的平衡時間;而密度梯度離心所需的時間則是指形成界限分明的區帶的時間。對於密度梯度離心和等密度梯度離心所需的區帶形成時間或平衡時間,影響因素很復雜,可通過試驗後確定。
顆粒的沉降時間又稱澄清時間,是指顆粒從離心樣品液液面完全沉降到離心管底所需的時間。沉降時間決定於顆粒沉降速度和沉降距離。
(三)溫度和PH值
為了防止分離物質的凝集、變性和失活,除了在離心介質的選擇方面加以注意外,還必須控制好溫度及介質溶液的PH值等離心條件。離心溫度一般控制在4度左右,對於某些熱穩定性較好的酶等,離心也可在室溫下進行。但在超速或高速離心時,轉子高速旋轉會發熱從而引起溫度升高。故必須採用冷凍系統,使溫度保持在一定范圍內。
離心介質溶液的PH值應該是處於酶穩定的PH范圍內,必要時可採用緩沖液。另外,過酸或過鹼還可能引起轉子和離心機的其他部件的腐蝕,應盡量避免。