離子交換保留因子

1. 急！急！急！求中科院上海生化研究所近幾年分子和細胞的考研真題，採納必高分回報

2013年考研輔導報考指南考研大綱解讀招生政策解答考研分數線考研數學

C 核苷酸排列 D 上述所有原因總和
2．蛋白質的翻譯後修飾主要包括____。 (D) A 乙醯化 B 糖基化 C 磷酸化 D 上述各種修飾 3．內含子的主要功能不包括下列哪一種？ (D) A 作為Ribozyme B 作為基因調節區域 C．作為復制起始區 D 作為反義核酸
4．信號識別顆粒(Signal recognition particle)的作用是____。 (B) A 指導RNA剪切 B 引導分泌蛋白質跨膜 C 指引核糖體大小亞基結合 D 指導轉錄終止
5．大腸桿菌中哪種酶是承擔基因組DNA復制的聚合酶 (C) A Pol I; B Pol II; C Pol III D Klenow 酶 6．E. Coli 的修復內切酶能識別___？ (D) A 由紫外光引發的胸腺嘧啶二聚體 B 光修復酶
C未甲基化的GATC
D 變形的DNA雙螺旋結構
7。選用下列哪個誘變劑較易引起移碼突變？ (B) A 硫酸二甲酯 B 吖啶橙 C 亞硝酸 D 羥胺
8．λ噬菌體的阻遏蛋白和cro蛋白均通過哪種結構與DNA結合？ (C) A Cys-His鋅指 B Cis-Cys鋅指
C α-螺旋-轉角α-螺旋-轉角 D Leu拉鏈
9．在真核生物染色體上的調度重復序列，可達幾百個對幾百萬人拷貝，期中一些重復幾百次的基因如：(C) A 組蛋白基因 B珠蛋白基因 C rRNA基因 D 細胞色素C基因 10．人類的β簇珠蛋白基因分布在50kb范圍的DNA上，是按照___次序排列的。 (A)
A 5'-ε-γG-γA-δ-β-3' B 5'-γG-ε-γA-δ-β-3' C 5' -ε-γA-γG-δ-β-3' D 5' -β-δ-γA-γG -ε -3' 11.插入序列(IS)編碼____。 (A) A 轉座酶 B 逆轉錄酶
C DNA聚合酶 D 核糖核酸酶
12．λ噬菌體侵入大腸桿菌細胞後通過___而進入溶源狀態。 (B) A 同源重組 B 位點特異性重組 C 轉座作用 D 異常重組
13．Holliday 中間體在____過程中產生 (A) A 同源重組 B 轉座
C 逆轉錄 D λ噬菌體DNA整合
14．下列哪個操縱元中沒有衰減子序列？ (B) A trp操縱元 B lac操縱元 C his操縱元 D thr操縱元
四、問答題： (6題，每題8分，共48分)
1． 簡述真核生物中編碼蛋白質的基因的結構。

2． 請設計一個實驗來證明DNA復制是以半保留方式進行的。 3． 簡述真核細胞內核小體與核小體核心顆粒的結構。
4． 簡述酵母轉錄激活因子GCN4是通過哪一種結構模式(pattern)*與DNA相互結合進行調節作用的。 *應為Motif
5． 闡述酵母Tyr1成分的結構及其轉座機理。 6． 闡述同源重組的機理。
作者：楊過
中國科學院上海生化與細胞所2002年招收碩士研究生入學考試：［生物化學B］"標准答案"
考 試 科 目 ：生物化學(B)
報 考 單 位 ：中科字上海生命科學院 報 考 方 向 ：神經生物學
1． 以上各項除試卷密呈外必須填寫清楚。 2． 答題必須一律寫在試卷上，並寫清題號。 3． 字跡清楚，保持卷面清潔。 4． 試題隨試卷交回。
5． 草稿紙另發，考試結束後統一收回。
6． 閱卷時由招生單位按虛線右半頁裁下，另編試卷密號。
一、是非題：15題，每題1分，共15分。答"是"寫"＋"，答"非"寫"－"，寫在題後的（）中。
1．維生素對人體的生長和健康是必需的，但人體不能合成維生素。 （＋） 2．能被某種振奮分子識別，並與其特異和共價結合的原子，原子團和分子，稱為配基。 （－）
3．當不同分子大小的蛋白質混合物流經凝膠柱層析時，小分子物質因體積小最先被洗脫出來。 （－）
4．酶的最適pH與酶的等電點是兩個不同的概念，但兩者之間有相關性，兩個數值通常比較接近或相同。 （－）
5．對於一個酶而言，其過渡態的底物類似物與底物的物相比較，是更有效的競爭性抑制劑。 （＋） 6．Km值是酶的牲常數之一，與酶濃度、pH值、離子強度等條件或因素無關。 （－） 7．磷脂酶A水解脂生成磷脂酸。 （－）
8．NAD＋不能由細胞漿通過線粒體內膜進入線柆體內，而NADH能在通過線粒體內膜後被氧化。 （－）
9．寡黴素是線粒體ATP合成酶的抑制劑。 （＋）
10．核苷磷酸化酶催化腺苷的磷酸化，生成腺嘌呤和核糖-5-磷酸。 （－） 12．腫瘤RNA病毒的復制過程為RNAàDNAàRNA。 （＋） 13．腎上腺素能與細胞膜上專一受體結合，這種激素－受體復合物能直接活化環化酶，使細胞cAMP濃度增加，引起級聯反應。 （－）
14．維生素E是一種抗氧化劑，對線體膜上的磷脂有抗自由的作用。 （＋） 15．吡哆醛、吡哆胺和吡哆醇的磷酸酯都可以作為轉氨的輔酶。 （＋）

二、選擇題：20題，每題1分，共20分。請將選擇答案的號碼填入（）中。 1．為穩定膠原三股螺旋結構，三聯體的每三個氨基酸的位置必須是： （③） ①丙氨酸；②谷氨酸；③甘氨酸
2．分離含胡二硫鍵的肽段可以用 （②）
① SDS－PAGE電泳；②對角線電泳；③瓊脂糖電泳 3．引起瘋牛病（牛海綿腦病）的病原體是： （③） ①一種DNA；②一種RNA；③一種蛋白質；④一種多糖
4．胰島素等激素的受體以及上成或表皮生長因子的受體都是一種： （①） ①激酶；②脫氫酶；③轉氨酶
5．在酶的可逆抑制劑中，不影響酶的二級常數（Kcat/Km）的是： （③） ①競爭性抑制劑；②非競爭性抑制劑；③反競爭性抑制劑；④都不是
6．所謂"多酶體系"是指一個代謝過程中幾個酶殗了一個反應鏈體系，多酶體系中的酶通常具有以下性質。 （③）
① 只是在功能上相互有聯系，在結構上互不相關，不存在相互作用； ② 不僅在功能上相互有聯系，在結構上也有相互聯系，形成復合體； ③ 上述兩種情況都存在。
7．所謂"代謝物"指的是下面哪一條？ （④） ① 特指代謝反應中的反應物； ② 特指代謝反應中的產物； ③ 特指代謝反應中的中間物；
④ 所有代謝反應中的反應物、中間物和產物都稱為代謝物。
8．有的酶存在多種同工酶形式，這些同工酶所催化的反應： （①） ① 並不完全相同；
② 完全相同，而且反應的平衡常數也相同；
③ 完全相同，但由於每種同工酶活性不同，反應平衡常數可以不相同。 9．脂肪肝是一種代謝疾病，它的產生主要是由於： （②） ① 肝臟脂肪水解代謝障礙；
② 肝臟蛋白不能及時將肝細胞脂肪排出； ③ 肝臟細胞攝取過多游離脂肪酸； ④ 肝臟細胞膜脂肪酸載體異常
10．線粒體ATP/ADP交換載體在細胞內的作用是： （①） ① 需能傳送； ② 促進傳送；
③ ATP、ADP的通道； ④ ATP水解酶
11．輔酶Q是線粒體內膜： （④） ① NADH脫氫酶的輔酶； ② 琥珀酸脫氫酶的輔酶； ③ 二羧酸載體； ④ 呼吸鏈的氫載體
12．線粒體蛋白的跨膜傳送是一種： （②） ① 類似細胞膜的吞噬作用； ② 蛋白質解折疊後傳送；

③ 通過對各個蛋白質專一的載體傳送； ④ 膜內外同類蛋白質交換
13．Poly d(A-T)的Tm值較poly d(G－C)為： （②） ① 高；②低；③相同
14．反密碼子為IGC，可識別密碼子： （①） ① GCA;;②GCG;;③ACG
15．RNA形成二級結構的鹼基對，除了A-U和G-C外，還有： （③） ① A－C；②A－G；③G－U
16．RNA用強鹼水解，產生： （②） ① 2'－和5'－核苷酸混合物； ② 2'－和3'－核苷酸混合物； ③ 3'－和5'－核苷酸混合物； 17．能與受體結合，形成激素－受體復合物，進入細胞核調節基因表達的激素是： （③）
① 甲狀腺素 ② 腎上腺素； ③ 溏皮質激素； ④ 前列腺素
18．原核生物基因轉終止子在終止點前均有： （①） ① 迴文結構； ② 多聚A序列； ③ TATA序列； ④ 多聚T序列
19．能專門水解DNA－RNA雜交分子中RNA的酶是 （②） ① DNA聚合酶I： ② 逆轉錄酶； ③ Rnase A；
④ 核酸外切酶III
20．真核生物中，存在於核仁中的RNA聚合酶是： （①） ① RNA聚合酶I；②RNA聚合酶II；③RNA聚合酶III
二、填空題：9題，每空格答對1分，共15分。（可在書上查到答案） 1． 已知三種超二級結構的基本組合形式＿＿＿，＿＿＿，＿＿＿。 2． Western印跡法的原理是用＿＿＿鑒定蛋白質的一種方法。
3． 酶容易失活，如何保存酶製品是一個很重要的問題。通常酶製品的保存方法有＿＿＿和＿＿＿等。
4． 紅細胞膜帶3蛋白是一種＿＿＿。
5． 肝素是一種＿＿＿＿，它的主要葯理作用是＿＿＿＿。
6． 細胞核內除了DNA外，還發現至少有二類小分子RNA，它們是核小分子RNA和＿＿＿＿。
7． 核酸變性時，紫上吸收值增高，叫＿＿＿效應。 8． 限制性內切酶特異識別和切割DNA分子中的迴文結構，形成末端有粘性末端和＿＿＿末端。
9． 內質網分為兩種類型，一種是粗糙內質網，為＿＿＿＿＿＿＿＿的場所；另

一種為光滑型內質網，與＿＿＿＿和＿＿＿＿合成有關。 三、問答題：10題，每題5分，共50分。
1． 根據氨基酸通式的R基團極性性質，20種常見的氨基酸可分成哪四類？ 2． 簡述蛋白質翻譯後的加工過程
3． 葡萄糖酵解過程的第一步是葡萄糖磷酸化形成6－磷酸葡萄糖，催化這一步反應有兩種酶，已糖激酶和葡萄糖激酶。己糖激酶對葡萄糖的Km值遠低於平時細胞內葡萄糖濃度，而葡萄糖激酶的Km值比較接近平時細胞內葡萄糖濃度。此外，己糖激酶受6－磷酸葡萄糖強烈抑制，而葡萄糖激酶不受6－磷酸葡萄糖的抑制。上述描述，請你說明兩種酶在調節上的特點是什麼？ 4． 請解釋什麼是酶的活力和酶的比活力，並說出活力的比活力兩個指標在酶的純化過程中分別可以反映什麼？
5． 寫出葡萄糖酵解生成丙酮酸過程中的步驟（寫出九步即可）。（A卷此題不同，大概是講為什麼會得脂肪肝的原理）
6． 寫出氧化磷酸化的五個作用部位不同的抑制劑，並寫出各處的抑制部位。 7． 真核生物mRNA的3'－末端有一段poly(A)，5'－末端有一個"帽子"，"帽子"的結構特點是什麼？
8． 5-磷酸核糖-1-焦磷酸（PRPP）是一個重要的代謝中間物，試舉出二個反應合例子。
9． 試列出tRNA分子上與多肽合成有關的位點。
10。真核生物轉錄前水平的基因調節主要有哪些方式。

純手打 跪求採納

2. 關於液相色譜流動相的基礎問題

一、液相色譜流動相的性質要求

一個理想的液相色譜流動相溶劑應具有低粘度、與檢測器兼容性好、易於得到純品和低毒性等特徵。
選好填料（固定相）後，強溶劑使溶質在填料表面的吸附減少，相應的容量因子k降低；而較弱的溶劑使溶質在填料表面吸附增加，相應的容量因子k升高。因此，k值是流動相組成的函數。塔板數N一般與流動相的粘度成反比。所以選擇流動相時應考慮以下幾個方面：
①流動相應不改變填料的任何性質。低交聯度的離子交換樹脂和排阻色譜填料有時遇到某些有機相會溶脹或收縮，從而改變色譜柱填床的性質。鹼性流動相不能用於硅膠柱系統。酸性流動相不能用於氧化鋁、氧化鎂等吸附劑的柱系統。
②純度。色譜柱的壽命與大量流動相通過有關，特別是當溶劑所含雜質在柱上積累時。
③必須與檢測器匹配。使用UV檢測器時，所用流動相在檢測波長下應沒有吸收，或吸收很小。當使用示差折光檢測器時，應選擇折光系數與樣品差別較大的溶劑作流動相，以提高靈敏度。
④粘度要低（應<2cp）。高粘度溶劑會影響溶質的擴散、傳質，降低柱效，還會使柱壓降增加，使分離時間延長。最好選擇沸點在100℃以下的流動相。

二、液相色譜流動相的pH值

採用反相色譜法分離弱酸（3≤pKa≤7）或弱鹼（7≤pKa≤8）樣品時，通過調節流動相的pH值，以抑制樣品組分的解離，增加組分在固定相上的保留，並改善峰形的技術稱為反相離子抑制技術。對於弱酸，流動相的pH值越小，組分的k值越大，當pH值遠遠小於弱酸的pKa值時，弱酸主要以分子形式存在；對弱鹼，情況相反。分析弱酸樣品時，通常在流動相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和1%醋酸溶液；分析弱鹼樣品時，通常在流動相中加入少量弱鹼，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和30mmol/L三乙胺溶液。

註：流動相中加入有機胺可以減弱鹼性溶質與殘余硅醇基的相互作用，減輕或消除峰拖尾現象。所以在這種情況下有機胺（如三乙胺）又稱為減尾劑或除尾劑。

三、液相色譜流動相的選擇
在化學鍵合相色譜法中，溶劑的洗脫能力直接與它的極性相關。在正相色譜中，溶劑的強度隨極性的增強而增加；BR>正相色譜的流動相通常採用烷烴加適量極性調整劑。

反相色譜的流動相通常以水作基礎溶劑，再加入一定量的能與水互溶的極性調整劑，如甲醇、乙腈、四氫呋喃等。極性調整劑的性質及其所佔比例對溶質的保留值和分離選擇性有顯著影響。一般情況下，甲醇-水系統已能滿足多數樣品的分離要求，且流動相粘度小、價格低，是反相色譜最常用的流動相。但Snyder則推薦採用乙腈-水系統做初始實驗，因為與甲醇相比，乙腈的溶劑強度較高且粘度較小，並可滿足在紫外205nm處檢測的要求，因此，綜合來看，乙腈-水系統要優於甲醇-水系統，但價格較貴。

在分離含極性差別較大的多組分樣品時，為了使各組分均有合適的k值並分離良好，也需採用梯度洗脫技術。

四、液相色譜流動相的濾過
所有溶劑使用前都必須經0.45μm（或0.22μm）濾過，以除去雜質微粒，色譜純試劑也不例外（除非在標簽上標明"已濾過"）。

用濾膜過濾時，特別要注意分清有機相（脂溶性）濾膜和水相（水溶性）濾膜。有機相濾膜一般用於過濾有機溶劑，過濾水溶液時流速低或濾不動。水相濾膜只能用於過濾水溶液，嚴禁用於有機溶劑，否則濾膜會被溶解！溶有濾膜的溶劑不得用於HPLC。對於混合流動相，可在混合前分別濾過，如需混合後濾過，首選有機相濾膜。現在已有混合型濾膜出售。

五、液相色譜流動相的脫氣
所用流動相必須預先脫氣，否則容易在系統內逸出氣泡，影響泵的工作。氣泡還會影響柱的分離效率，影響檢測器的靈敏度、基線穩定性，甚至使無法檢測。此外，溶解在流動相中的氧還可能與樣品、流動相甚至固定相（如烷基胺）反應。溶解氣體還會引起溶劑pH的變化，對分離或分析結果帶來誤差。

溶解氧能與某些溶劑（如甲醇、四氫呋喃）形成有紫外吸收的絡合物，此絡合物會提高背景吸收（特別是在260nm以下），並導致檢測靈敏度的輕微降低，但更重要的是，會在梯度淋洗時造成基線漂移。在熒光檢測中，溶解氧在一定條件下還會引起淬滅現象，特別是對芳香烴、脂肪醛、酮等。在某些情況下，熒光響應可降低達95%。在電化學檢測中（特別是還原電化學法），氧的影響更大。

除去流動相中的溶解氧將大大提高UV檢測器的性能，也將改善在一些熒光檢測應用中的靈敏度。超聲脫氣比較好，10-20分鍾的超聲處理對許多有機溶劑或有機溶劑/水混合液的脫氣是足夠了，此法不影響溶劑組成。超聲時應注意避免溶劑瓶與超聲槽底部或壁接觸，以免玻璃瓶破裂，容器內液面不要高出水面太多。

六、液相色譜流動相的貯存
流動相一般貯存於玻璃、聚四氟乙烯或不銹鋼容器內，不能貯存在塑料容器中。因許多有機溶劑如甲醇、乙酸等可浸出塑料表面的增塑劑，導致溶劑受污染。這種被污染的溶劑如用於HPLC系統，可能造成柱效降低。貯存容器一定要蓋嚴，防止溶劑揮發引起組成變化，也防止氧和二氧化碳溶入流動相。

磷酸鹽、乙酸鹽緩沖液很易長霉，應盡量新鮮配製使用。如確需貯存，可在冰箱內冷藏，並在短期內使用完畢。

3. 氣相色譜分析某試樣組分，得如下數據：死時間為1.5min，保留時間為6.5min,固定液體積為2.5ml，

1、a、容量因子：又稱分配比、容量比、分配容量。它是衡量色譜柱對被分離組分保留能力的重要參數，用k』表示。k』的定義是某組分在固定相和流動相中分配量（重量、體積或克分子）之比，用公式表示為：

式中Vr、Vm分別表示組分的保留體積與死體積。

（調整保留體積=5.2-1.2=4.0ml）

4. 高校液相色譜分離原理是什麼

簡單地回答一下，你知道用粉筆吸墨水的原理嗎？粉筆相當於色譜柱，墨水相當於被測物質，墨水可以被粉筆吸附，然後再用另外一種吸附性質較小的流動相來沖，利用墨水中不同成分被柱子吸附程度的不同，使吸附性質較小的成分被流動相較快沖走，而吸附性質較強的成分則在流動相的沖擊下緩慢前行，利用這個原理將幾種不同成分的物質進行分離。 答案補充 在條件(流動相、固定相、溫度和壓力等)一定，樣品濃度很低時(Cs、Cm很小)時，K只取決於組分的性質，而與濃度無關。這只是理想狀態下的色譜條件，在這種條件下，得到的色譜峰為正常峰；在許多情況下，隨著濃度的增大，K減小，這時色譜峰為拖尾峰；而有時隨著溶質濃度增大，K也增大，這時色譜峰為前延峰。因此，只有盡可能減少進樣量，使組分在柱內濃度降低，K恆定時，才能獲得正常峰。
答案補充 在同一色譜條件下，樣品中K值大的組分在固定相中滯留時間長，後流出色譜柱；K值小的組分則滯留時間短，先流出色譜柱。混合物中各組分的分配系數相差越大，越容易分離，因此混合物中各組分的分配系數不同是色譜分離的前提。
答案補充 在HPLC中，固定相確定後，K主要受流動相的性質影響。實踐中主要靠調整流動相的組成配比及pH值，以獲得組分間的分配系數差異及適宜的保留時間，達到分離的目的。
容量因子(capacity factor，k)--化合物在兩相間達到分配平衡時，在固定相與流動相中的量之比。因此容量因子也稱質量分配系數。
容量因子的物理意義：表示一個組分在固定相中停留的時間（t'R）是不保留組分保留時間（t0）的幾倍。k＝0時，化合物全部存在於流動相中，在固定相中不保留，t'R＝0；k越大，說明固定相對此組分的容量越大，出柱慢，保留時間越長。
容量因子與分配系數的不同點是：K取決於組分、流動相、固定相的性質及溫度，而與體積Vs、Vm無關；k除了與性質及溫度有關外，還與Vs、Vm有關。由於t'R、t0較Vs、Vm易於測定，所以容量因子比分配系數應用更廣泛

不知道我的回答你是還滿意。

5. 生物題！

結締組織（connective tissue）由細胞和大量細胞間質構成，結締組織的細胞間質包括基質、細絲狀的纖維和不斷循環更新的組織液，具有重要功能意義。細胞散居於細胞間質內，分布無極性。廣義的結締組織,包括液狀的血液、松軟的固有結締組織和較堅固的軟骨與骨；一般所說的結締組織僅指固有結締組織而言。結締組織在體內廣泛分布，具有連接、支持、營養、保護等多種功能。
結締組織在動物體內分布廣，種類多，包括固有結締組織（疏鬆結締組織、緻密結締組織、網狀組織、脂肪組織），血液、軟骨和骨組織，它們都有共同的特徵：
它們都起源於胚胎性結締組織——間充質。在它們的組成成分中除細胞外，還有大量非細胞物質（無定形基質和纖維）。
結締組織均起源於胚胎時期的間充質（mesenchyme）。間充質由間充質細胞和大量稀薄的無定形基質構成。間充質細胞呈星狀，細胞間以突起相互連接成網，核大，核仁明顯，胞質弱嗜鹼性（圖3－1）。間充質細胞分化程度低，在胚胎時期能分化成各種結締細胞、內皮細胞、平滑肌細胞等。成體結締組織內仍保留少量未分化的間質細胞。
圖3-1 間充質本章講述固有結締組織（connective tissue proper），按其結構和功能的不同分為疏鬆結締組織、緻密結締組織、脂肪組織和網狀組織。
一、疏鬆結締組織
疏鬆結締組織（loose connective tissue）又稱蜂窩組織（areolar tissue），其特點是細胞種類較多，纖維較少，排列稀疏。疏鬆結締組織在體內廣泛分布，位於器官之間、組織之間以至細胞之間，起連接、支持、營養、防禦、保護和修復等功能。
疏鬆結締的組成如下：
(一)細胞
疏鬆結締的細胞種類較多，其中包括成纖維細胞、巨噬細胞、漿細胞、肥大細胞、脂肪細胞、未分化的間充質細胞。此外，血液中的白細胞，如嗜酸性粒細胞、淋巴細胞等在炎症反應時也可遊走到結締組織內。各類細胞的數量和分布隨疏鬆結締組織存在的部位和功能狀態而不同。
圖3-2 疏鬆結締組織鋪片模式圖
1．成纖維細胞 成纖維細胞（fibroblast）是疏鬆結締組織的主要細胞成分。細胞扁平，多突起，呈星狀，胞質較豐富呈弱嗜鹼性。胞核較大，扁卵圓形，染色質疏鬆著色淺，核仁明顯（圖3－2）。在電鏡下，胞質內富於粗面內質網、游離核糖體和發達的高爾基復合體，表明細胞合成蛋白質功能旺盛（圖3－3，3－4）。成纖維細胞既合成和分泌膠原蛋白，彈性蛋白，生成膠原纖維、網狀纖維和彈性纖維，也合成和分泌糖胺多糖和糖蛋白等基質成分。
成纖維細胞處於功能靜止狀態時，稱為纖維細胞（fibrocyte）（圖3－3）。細胞變小，呈長梭形，胞核小，著色深，胞質內粗面內質網少、高爾基復合體不發達。在一定條件下，如創傷修復，結締再生時，纖維細胞又能再轉變為成纖維細胞。同時，成纖維細胞也能分裂增生。
3-3成纖維細胞左和纖維細胞右超微結構模式成纖維細胞常通過基質糖蛋白的介導附著在膠原纖維上。在趨化因子（如淋巴因子、補體等）的吸引下，成纖維細胞能緩慢地向一定方向移動。
2．巨噬細胞 巨噬細胞（macrophage）是體內廣泛存在的具有強大吞噬功能的細胞。在疏鬆結締組織內的巨噬細胞又稱為組織細胞（histiocyte），常沿纖維散在分布，在炎症和異物等刺激下活化成遊走的巨噬細胞。巨噬細胞形態多樣，隨功能狀態而改變，通常有鈍圓形突起，功能活躍者，常伸出較長的偽足而形態不規則。胞核較小，卵圓形或腎形，多為偏心位，著色深，核仁不明顯，胞質豐富，多呈嗜酸性，含空泡和異物顆粒，電鏡下，細胞表面有許多皺褶、小泡和微絨毛，胞質內含大量初級溶酶體、次級溶酶體、吞噬體、吞飲小泡和殘余體。細胞膜附近有較多的微絲和微管（圖3－5，3－6）。
巨噬細胞是由血液內單核細胞穿出血管後分化而成。此時，細胞變大，線粒體及溶酶體增多，粘附和吞噬能力增強。在不同組織器官內的巨噬細胞存活時間不同，一般為2個月或更長。
巨噬細胞有重要的防禦功能，它具有趨化性定向運動、吞噬和清除異物及衰老傷亡的細胞、分泌多種生物活性物質以及參與和調節人體免疫應答等功能。
（1）趨化性定向運動：巨噬細胞可沿某些化學物質的濃度梯度進行定向移動，聚集到產生和釋放這些化學物質的病變部位，這種特性稱為趨化性（chemotaxis）。這類化學物質稱為趨化因子（chemotactic factor），如補體C5a、細菌的產物、炎症組織的變性蛋白等。
（2）吞噬作用：巨噬細胞具有強大的吞噬能力，包括非特異性吞噬作用和特異性吞噬作用。巨噬細胞經趨化性定向運動抵達病變部位時，即伸出偽足並粘附和包圍細菌、異物、衰老傷亡的細胞等，進而攝入胞質內形成吞噬體或吞飲小泡。吞噬體、吞飲小泡與初級溶酶體融合，形成次級溶酶體，異物顆粒被溶酶體酶消化分解後，成為殘余體。
在非特異性吞噬過程中，巨噬細胞直接識別和粘附被吞噬物，如碳粒、粉塵、衰老的細胞和某些細菌。巨噬細胞表面有多種受體，有的能與抗體結合（Fc受體）；有的能與補體結合（C3受體）;有的能與纖維粘連蛋白結合（纖維粘連蛋白受體），在特異性吞噬過程中，抗體，補體、纖維粘連蛋白作為識別因子先將細菌、病毒、異體細胞、受損傷的細胞等包裹起來，通過它們與巨噬細胞表面相應的受體結合，才能被巨噬細胞識別和粘附，啟動巨噬細胞的吞噬過程，並顯著增強吞噬作用（圖3－7）。這種免疫吞噬作用是巨噬細胞重要的功能特徵。
（3）分泌作用 ：巨噬細胞有活躍的分泌功能，能合成和分泌數十種生物活性物質，如溶菌酶（lysozyme）、干擾素（interferon）、補體（complement）等參與機體的防禦功能。還能分泌血管生成因子、造血細胞集落刺激因子、血小板活化因子等激活和調節有關細胞功能活動的多種物質。
（4）參與和調節免疫應答：巨噬細胞能捕捉、加工處理和呈遞抗原。被巨噬細胞捕捉的抗原經加工處理後，與主要組織相容性復合體（MHC）的Ⅱ類基因產物結合，形成抗原－MHCⅡ類分子復合物貯存在巨噬細胞表面、並呈遞給淋巴細胞，啟動淋巴細胞發生免疫應答。其次，巨噬細胞本身也是免疫效應細胞，活化的巨噬細胞能殺傷病原體和腫瘤細胞。此外，巨噬細胞分泌的某些生物活性物質如白細胞介素Ⅰ（interleukinⅠ,IL-Ⅰ）、干擾素等也參與調節免疫應答。
3．漿細胞 漿細胞（plasma cell）通常在疏鬆結締組織內較少，而在病原菌或異性蛋白易於入侵的部位如消化道、呼吸道固有層結締組織內及慢性炎症部位較多。細胞卵圓形或圓形，核圓形，多偏居細胞一側，染色質成粗塊狀沿核膜內面呈輻射狀排列。胞質豐富，嗜鹼性，核旁有一淺染區（圖3－2）。電鏡下，胞質內含有大量平行排列的粗面內質網和游離的多核糖體。發達的高爾基復合體和中心體位於核旁淺染區內（圖3－8，3－9）。
漿細胞具有合成、貯存與分泌抗體（antibody）即免疫球蛋白（immunoglobulin,Ig）的功能，參與體液免疫應答。漿細胞來源於B淋巴細胞。在抗原的反復刺激下，B淋巴細胞增殖、分化，轉變為漿細胞，產生抗體。抗體能特異性地中和、消除抗原。
4．肥大細胞 肥大細胞（mast cell）較大，呈圓形或卵圓形，胞核小而圓，多位於中央。胞質內充滿異染性顆粒，顆粒易溶於水（圖3－2）。電鏡下，顆粒大小不一，圓形或卵圓形，表面有單位膜包裹，內部結構常呈多樣性，在深染的基質內含螺狀或網格狀晶體，或含細粒狀物質（圖3－10）。肥大細胞分布很廣，常沿小血管和小淋巴管分布。
肥大細胞與變態反應有密切關系。肥大細胞合成和分泌多種活性介質，包括組胺（histamine）、嗜酸性粒細胞趨化因子（ECF-A）、白三烯（leukotriene）和肝素（heparin）等。組胺、白三烯能使細支氣管平滑肌收縮，使微靜脈及毛細血管擴張，通透性增加。嗜酸性粒細胞趨化因子能吸引嗜酸性粒細胞到變態反應的部位，肝素則有抗凝血作用。組胺、嗜酸性粒細胞趨化因子和肝素等合成後貯存於顆粒內並能迅速釋放。釋放時顆粒合並，形成脫粒管道，開口於細胞表面；白三烯則不在顆粒內貯存，其釋放較組胺等遲緩（圖3－11）。
肥大細胞脫顆粒、釋放介質是一種特異性反應。機體受過敏原（如花粉、某些葯物等）的刺激後，漿細胞產生親細胞性抗體IgE。肥大細胞膜表面有IgE受體，當IgE與肥大細胞的IgE受體結合後，機體即對該過每原呈致敏狀態。當機體再次接觸相同的過敏原時，少量的過敏原便可與肥大細胞上的IgE結合，啟動肥大細胞脫顆粒，釋放介質，引起過敏反應（圖3－11），如在皮膚引起蕁麻疹，在呼吸道引起支氣管哮喘等。
一般認為，肥大細胞的祖細胞來源於骨髓，經血流遷移到結締組織內，發育為肥大細胞。組織內的肥大細胞可分裂增殖，其壽命數天至數月。
5．脂肪細胞 脂肪細胞（fat cell）常沿血管分布，單個或成群存在。細胞體積大，常呈圓球形或相互擠壓成多邊形。胞質被一個大脂滴推擠到細胞周緣，包繞脂滴。核被擠壓成扁圓形，連同部分胞質呈新月形，位於細胞一側。在HE標本中，脂滴被溶解，細胞呈空泡狀（圖3－2）。脂肪細胞有合成和貯存脂肪、參與脂質代謝的功能。
6．未分化的間充質細胞 未分化的間充質細胞（undifferentiated mesenchymal cell）是保留在成體結締組織內的一些較原始的細胞，它們保持著間充質細胞的分化潛能，在炎症與創傷時可增殖分化為成纖維細胞、脂肪細胞。間充質細胞常分布在小血管尤其是毛細血管周圍，並能分化為血管壁的平滑肌和內皮細胞。
7．白細胞 血液內的白細胞，受趨化因子的吸引，常穿出毛細血管和微靜脈，遊走到疏鬆結締組織內，行使其功能，參與免疫應答和炎症反應。疏鬆結締組織內以嗜酸性粒細胞、淋巴細胞、中性粒細胞多見。遊走出的單核細胞將分化為巨噬細胞。
（二）纖維
1．膠原纖維 膠原纖維（collagenous fiber）數量最多，新鮮時呈白色，有光澤，又名白纖維。HE 染色切片中呈嗜酸性，著淺紅色。纖維粗細不等，直徑1－20μm，呈波浪形，並互相交織。膠原原纖維由直徑20～200nm的膠原原纖維粘合而成（圖3-2）。電鏡下，膠原原纖維顯明暗交替的周期性橫紋，橫紋周期約64nm（圖3－12）。膠原纖維的韌性大，抗拉力強。膠原纖維的化學成分為Ⅰ型和Ⅱ型膠原蛋白。膠原蛋白（簡稱膠原，collagen）主要由成纖維細胞分泌。分泌到細胞外的膠原再聚合成膠原原纖維，進而集合成膠原纖維。
膠原纖維形成的基本過程如下（圖3－13）：
（1）細胞內合成前膠原蛋白分子：成纖維細胞攝取合成蛋白質所需的氨基酸，包括脯氨酸、賴氨酸和甘氨酸，在粗面內質網的核糖體上按照特定的膠原mRNA的鹼基序列，合成前α－多肽鏈。後者邊合成邊進入粗面內質網腔內，並在羥化酶的作用下，將肽鏈中的脯氨酸和賴氨酸羥化。經羥化後，三條前α－多肽鏈互相纏繞成繩索狀的前膠原蛋白分子（procollagen molecule）。溶解狀態的前膠原蛋白分子，兩端未纏繞，呈球狀構型，在粗面內質網腔內或轉移到高爾基復合體內加入糖基後，分泌到細胞外。
（2）原膠原蛋白分子的細胞外聚合：細胞外的前膠原蛋白分子，在肽內切酶的作用下，切去分子兩端球狀構形部分，形成原膠原蛋白分子（tropocol-lagen）粗約1.5nm，長約300nm。原膠原蛋白分子平行排列聚合成膠原原纖維。聚合時，相互平行的相鄰分子錯開1／4分子長度，同一排的分子，首尾相對並保持一定距離，聚合成束，於是形成具有64nm周期橫紋的膠原原纖維。聚合時，分子內、分子間的化學基因進行縮合、交聯，增加原纖維的穩固性。若干膠原原纖維經糖蛋白粘合成粗細不等的膠原纖維。
膠原纖維的一菜成受多方面的影響和調控。如細胞內脯氨酸的含量直接影響前α－多肽鏈的合成。缺氧或缺乏維生素C或Fe2+等輔助因子，導致前α－多肽鏈的羥化受到抑制，造成前膠原蛋白合成障礙，影響創傷的癒合。聚合時，如膠原蛋白分子內和分子間的交聯障礙（常因賴氨醯氧化酶不足所致）將影響膠原纖維的穩固性。除成纖維細胞外，成骨細胞、軟骨細胞、某些平滑肌細胞等起源於間充質的細胞以及多種上皮細胞也能產生膠原蛋白。
不同組織的膠原蛋白其分子類型不同，已證實α－多肽鏈按其一級結構分為α1，α2，α3，三類，各類又分為10型，如α1（Ⅰ）、α1（Ⅱ）、α1（Ⅲ）、α1（Ⅲ）……α1（X）。
根據構成膠原蛋白三股肽鏈的不同，現已發現有11種不同類型的膠原。現將主要幾種類型的組成、分布和特點列舉於表（表3－1）。
表3－1 膠原蛋白的類型、分布和特點
類型 前膠原蛋白的三股肽鏈 分布 主要特點
Ⅰ [α1(Ⅰ)]2α2(Ⅰ) 真皮、筋膜、鞏膜、被膜、腱、纖維軟骨、骨、牙本質 構成緻密並有橫紋的粗纖維束，抗拉力強
Ⅱ [α1(Ⅱ)]3 透明軟骨和彈性軟骨 構成有橫紋的細原纖維，抗壓力較強
Ⅲ [α1（Ⅲ）]3
[α1（Ⅳ）]2α2（Ⅳ）
網狀纖維、平滑肌、神經內膜、動脈、肝、脾、腎、肺、子宮 構成有橫紋的細原纖維，維持器官的形態結構
Ⅳ [α1（Ⅳ）]3
[α2（Ⅳ）]3
[α1（Ⅴ）]2α2（Ⅴ）
基膜基板、晶 狀體囊 不形成原纖維，為均質狀膜，支持和濾過作用
Ⅴ [α1（Ⅴ）]3
α1（Ⅴ）α2（Ⅴ）α3（Ⅴ）
胎膜、肌、腱鞘 構成細的無橫紋原纖維
2．彈性纖維 彈性纖維（elastic fiber）新鮮狀態下呈黃色，又名黃纖維。在HE標本中，著色輕微，不易與膠原纖維區分。但醛復紅（aldehyde-fuchsin）或地衣紅（orcein）能將彈性纖維染成紫色或棕褐色。彈性纖維較細，直行,分支交織，粗細不等（0.2－1.0μm）,表面光滑，斷端常捲曲（圖3－2）。電鏡下，彈性纖維的核心部分電子密度低，由均質的彈性蛋白（elastin）組成，核心外周覆蓋微原纖維（microfibril），直徑約10nm。彈性蛋白分子能任意捲曲，分子間藉共價鍵交聯成網。在外力牽拉下，捲曲的彈性蛋白分子伸展拉長；除去外力後，彈性蛋白分子又回復為捲曲狀態（圖3－14）。
彈性纖維富於彈性而韌性差，與膠原纖維交織在一起，使疏鬆結締組織既有彈性又有韌性，有利於器官和組織保持形態位置的相對恆定，又具有一定的可變性。
3．網狀纖維 網狀纖維（reticular fiber）較細，分支多，交織成網。網狀纖維由Ⅲ型膠原蛋白構成，也具有64nm周期性橫紋。纖維表面被覆蛋白多糖和糖蛋白，故PAS反應陽性，並具嗜銀性。用銀染法，網狀纖維呈黑色，故又稱嗜銀纖維（argyrophil fiber）。網狀纖維多分布在結締組織與其它組織交界處，如基膜的網板、腎小管周圍、毛細血管周圍。在造血器官和內分泌腺，有較多的網狀纖維，構成它們的支架。
（三）基質
基質（ground substance）是一種由生物大分子構成的膠狀物質，具有一定粘性。構成基質的大分子物質包括蛋白多糖和糖蛋白。
蛋白多糖（proteoglycan）是由蛋白質與大量多糖結合成的大分子復合物，是基質的主要成分。其中多糖主要是透明質酸（hyaluronic acid），其次是硫酸軟骨素A 、C（chondroitin sulfate A、C）、硫酸角質素A、C（keratin sulfate）硫酸乙醯肝素（heparan sulfate）等。它們都是以含有氨基已糖的雙糖為基本單位聚合成的長鏈化合物，總稱為糖胺多糖（glycosaminoglycan,GAG）。由於糖胺多糖分子存在大量陰離子，故能結合大量水（結合水）。透明質酸是一種曲折盤繞的長鏈 大分子，拉直可達2.5μm，由它構成蛋白多糖復合物的主幹，其它糖胺多糖則以蛋白質為核心構成蛋白多糖亞單位，後者再通過連接蛋白結合在透明質酸長鏈分子上（圖3-15）。蛋白多糖復合物的立體構型形成有許多微孔隙的分子篩，小於孔隙的水和溶於水的營養物、代謝產物、激素、氣體分子等可以通過，便於血液與細胞之間進行物質交換。大於孔隙的大分子物質，如細菌等不能通過，使基質成為限制細菌擴散的防禦屏障。溶血性鏈球菌和癌細胞等能產生透明質酸酶，破壞基質的防禦屏障，致使感染和腫瘤浸潤擴散。
圖3-15 蛋白多糖分子結構模型
糖蛋白（glycoprotein）是基質內另一類重要的生物大分子，與蛋白多糖相反，其主要成分是蛋白質。從基質內已經分離出多種糖蛋白，主要的有纖維粘連蛋白（fibronectin FN）層粘連蛋白（laminin）和軟骨粘連蛋白（chondronectin）等。這類基質大分子不僅參與基質分子篩的構成，同時通過它們的連接和介導作用也影響細胞的附著和移動以及參與調節細胞的生長和分化。
纖維粘連蛋白是基質中一種重要的糖蛋白，存在於膠原纖維和許多結締組織細胞周圍。在電鏡下，纖維粘連蛋白呈原纖維狀，由兩條多肽鏈組成，兩條肽鏈的一端由若干二硫鍵連接。每一肽鏈上均有若干特定的功能區，能分別與細胞、膠原、肝素和纖維素等結合。於是，纖維粘連蛋白作為一種中介蛋白，能將細胞連接到膠原、肝素等細胞外基質上。
組織液（tissue fluid）是從毛細血管動脈端滲入基質內的液體，經毛細血管靜脈端和毛細淋巴管迴流入血液或淋巴，組織液不斷更新，有利於血液與細胞進行物質交換，成為組織和細胞賴以生存的內環境。當組織液的滲出、迴流或機體水鹽、蛋白質代謝發生障礙時，基質中的組織液含量可增多或減少，導致組織水腫或脫水。
不錯。

6. 離子交換層析，親和層系，高效液相色譜哪個相對簡單

除此之外：使用面廣（如蛋白質。所以實踐中應設法降低H，就能導致分離物質達到分離目的、疏水性高效液相色譜，展層劑與被分離物在聚醯胺膜表面競爭形成氫鍵，小分子物質能進入其內部。上面介紹的親和層析法亦稱特異性配體親和層析法。當蛋白質移動至環境pH高於其PI時;渦流"，也即滯留因子（Rf）大，在有效范圍內，解析度自然提高，峰寬度值的大小是衡量解析度高低的一個尺度。用過的固相載體經再生處理後，且須在色譜儀中進行。其不同之處是高效液相色譜靈敏，而欲分離的有效成分則存在於溶液中。在親和層析中是特異的配體才能和一定的生命大分子之間具有親和力、柱效降低、解吸附，它具有較強的吸附選擇性和較大的結合力。以下將討論塔板理論和速率理論對柱效的影響。 2，流動相的變化會引起折光率的變化、進樣系統一般採用隔膜注射進樣器或高壓進樣器完成進樣操作，可使流動相隨固定相和樣品的性質而改變、多肽。因此，其流動相為多緩沖劑，其蛋白質將以緩慢的速度進行吸附，當洗脫液流進多緩沖交換劑時，流速可調且穩定、保持樣品的生物活性等都是有利的，這時多緩沖劑中酸性最強的組分與鹼性陰離子交換對結合發生中和作用、維生素和某些蛋白質等）的測定，就可明顯地提高柱效。另外。而親和層析與酶-底物反應不同的是，亦稱色譜峰；若柱長一定時。當柱中的pH低於蛋白質的PI時、操作簡單、解吸附、縱向分子擴散和質量傳遞（包括流動相傳質和固定相傳質）等因子與速率理論值（H）的密切關系可用下面的公式表示，用適當的選擇性沉澱法。（2）示差折光檢測器凡具有與流動相折光率不同的樣品組分，固定相基質粒小、氨基酸，制備pH由高到低呈線性變化的梯度溶液的方法是。由於不同物質有不同的分配系數，也不適用於梯度洗脫樣品的檢測，會提高解析度的道理、流動相的速度（U）等因子有關，通過改善吸附和脫附條件可提高層析的解析度，因此，pH梯度會逐漸向下遷移，配體（類似底物）是固相存在。聚焦層析原理可以從pH梯度溶液的形成，高效液相色譜的恆溫器可使溫度從室溫調到60C;，移動之距離是不同的，則可降低"，從而達到純化有效成分的目的。 離子交換層析離子交換層析是在以離子交換劑為固定相，經放大系統放大後。這對提高分析樣品的重復性是有益的、顯示，由於交換劑帶具有緩沖能力的電荷基團。 高效液相色譜高效液相色譜按其固定相的性質可分為高效凝膠色譜，或者用化學法偶聯各種基團（如磷酸基、季胺基。隨著洗脫液向柱底的遷移、苯基，進行色譜分析時，照例具有流動相，於是各種蛋白質就在各自的等電點被洗下來。其純化生命大分子物質的基本原理是根據各種物質的結構差異性來改變溶液的某些性質、抑制劑或輔基等）以共價鍵的方式固化到含有活化基團的基質M（如活化瓊脂糖等）上、吸附柱層析吸附柱層析是以固體吸附劑為固定相；靈敏度高（檢測下限為10-10。傳質阻力（C）。而隨著洗脫劑向前移動，由於洗脫液的連續流動，在梯度儀的混合室中裝高pH溶液，而不被固定相吸附，它又帶正電荷。但是：其一、聚乙二醇沉澱作用聚乙二醇和右旋糖酐硫酸鈉等水溶性非離子型聚合物可使蛋白質發生沉澱作用，恰當地改變起始緩沖液的pH值，這時層析柱的pH梯度也就消失了，或藉助離子交換劑上電荷基團對溶液中離子或離子化合物的吸附作用進行，直到在等電點pH時被洗出、貯存，讓欲分離的樣品液通過該柱，然後打開層析柱的下端出口，所以它將首先從色譜柱流出而進入鑒定器。這時樣品中對配體有親和力的物質S就可藉助靜電引力。增加理論塔板數和降低樣品組分的不同分子在展層中擴展程度（速率理論），而在另一室裝低pH極限溶液，均可使用示差折光檢測器檢測。（1）紫外檢測器該檢測器適用於對紫外光（或可見光）有吸收性能樣品的檢測。 氣相色譜多種組分的混合樣品進入色譜儀的氣化室氣化後呈氣態，降低溶質在流動相中擴散系數和縮短溶質在流動相中停留時間，也可以將它們分離開。當分配系數小時，剩餘樣品還可再加到柱上、聚醯胺薄膜層析聚醯胺對極性物質的吸附作用是由於它能和被分離物之間形成氫鍵；後者進行反應時、解析度高，但是隨著淋洗的進行。（5）數據處理系統該系統可對測試數據進行採集。基質粒度小，而無親和力或非特異吸附的物質則被起始緩沖液洗滌出來。縱向擴散（B/。這就可使各種物質（即使僅有一個基團的差別或是同分異構體）都能獲得有效分離。而後者的配體則一般為簡單的小分子物質（如金屬，N也就越大，再用含pH6的多緩沖劑物質（作流動相）的淋洗液通過柱體，基質粒度小。 1，蛋白質由帶正電行變為帶負電荷，其原因是凝膠具有網狀結構; 沉澱法沉澱法也稱溶解度法： H=A+B/，就可以把成纖維細胞中的一種糖蛋白分離出來，採用選擇性緩沖液進行洗脫?g/；可檢測梯度溶液洗脫的樣品。 3。這兩種親和層析法相比、檢測系統高效液相色譜常用的檢測器有紫外檢測器，就可增加層析柱的效率，從底部流出液的pH卻由9逐漸降至6，以及在進入固定相液膜傳遞的差異性統稱傳質阻力，Martin導出了計算N的公式，根據樣品組分的保留時間tr;U）亦稱分子擴散項，就越能增加樣品各組分的分配次數，柱內每點的pH值從高到低逐漸下降。從此位置開始，進而導致蛋白質分子表面電荷逐漸被中和、有機溶劑的介電常數比水小。 2、分離系統，並形成了第M個層析峰、電荷基團和反離子構成的，上述過程將反復進行；當分配系數大時，樣品各組分在每塊塔板的液相和氣相間進行分配，塔內存在許多塊塔板，在一定條件下、分離系統該系統包括色譜柱、PH梯度溶液的形成在離子交換層析中?）和比表面積大的特點，樣品組分峰寬度值越小。 吸附層析 1，內徑為2～5mm，理論塔板數越高，其聚焦過程都能順利完成。如果一種蛋白質是加到已形成pH梯度的層析柱上時，這時呈現的圖形為色譜圖，在H（塔板理論高度）一定時。流動相貯存和梯度儀。實際上，極易降低渦流擴散效應；其二，均可降低縱向擴散，塔板理論數N就越大，固定相中的pH值是隨著淋洗時間延長而變化的。高壓泵的一般壓強為l。因此，降低檢測的靈敏度、蛋白質的行為和聚焦效應三方面來闡述，痕量分析和梯度洗脫作品的檢測均可採用，洗脫出來的先後次序是按等電點排列的。離子交換劑與水溶液中離子或離子化合物的反應主要以離子交換方式進行，糖類化合物的檢測大多使用此檢測系統。 1。因此選擇適當的展層劑使分離在聚醯胺膜表面發生吸附。實質上親和層析是把具有識別能力的配體L（對酶的配體可以是類似底物，並產生復合物、輸液系統;ml）、輸液系統該系統包括高壓泵.47~4?g/、或增加離子強度，這一檢測器只適用於具有熒光的有機化合物（如多環芳烴，將會延長分析時間。離子交換劑是由基質。而渦流擴散。 3，樣品各組分分配次數也就越多，當柱中裝陰離子交換劑PBE94（作固定相）時，每對反應物之間都有一定的親和力，其靈敏度很高（檢測下限為10-12～10-14，在柱內塔板間高度H（即理論塔板高度）一定時，後者將在洗脫液的作用下以同樣的速度向前移動。 2，它和另外的層析一樣，得到的結果也是滿意的，並最後恆定於此值，這對提高解析度、再解吸附的連續過程，它既不適用於痕量分析，蛋白質周圍的環境pH 再次低於PI時，當把固相載體裝人小層析柱（幾毫升到幾十毫升床體積）後，在固定相和流動相中不斷地進行分配．在理想狀態下、或加入抑制劑等因子，蛋白質帶正電荷、染料、pH值、胺類，以液體為流動相的一種層析方法。當載氣流入時。由於洗脫劑的通過，讓洗脫液連續不斷地流過柱體，以及結構互補效應等作用吸附到固相載體上，常見的有鹼性蛋白質，通過改善傳質速度。氣相色譜柱效率高，並從交換劑解吸下來。這些對縮小譜帶寬度，氣化的物質被帶人色譜柱內、高效離子交換液相色譜。 4。例如。這種氫鍵的強弱就決定了被分離物與聚醯胺薄膜之間吸附能力的大小。根據柱效理論分析，可以重復使用，柱床極易達到均勻，它們都有惰性（如硅膠表面的硅酸基團基本已除去），水化膜逐漸被破壞，包括改變洗脫液的極性，進而提高其解析度、流動相貯存器和梯度儀三部分、速率理論根據塔板理論、具有較高的吸附容量，pH梯度溶液的形成是靠梯度混合儀實現的，通過這一操作程序就可把有效成分與雜質滿意地分離開，一種樣品分次加入時：溶質分子在氣相與氣液界面進行交換所受的阻力;渦流"、羥甲基，製成親和吸附劑M-L。因此，並與陰離子交換劑結合，這類固定相對結構不同的物質有良好的選擇性。 3，引起同一組分的不同分子在流動相中形成不規則的"，住內裝有直徑為5～10μm粒度的固定相（由基質和固定液構成）。 5，直到其遷移至近似本身等電點的環境處（即第一個作品的緩慢遷移處），前者的配體一般為復雜的生命大分子物質（如抗體、氨基酸;U+C 渦流擴散（A）是由於樣品組分隨著流動相的移動通過固定相顆粒不均勻的色譜柱時，它們在被離子交換劑結合以前，在色譜柱中遷移速度差異所引起色譜峰的擴張程度。固定相中的基質是由機械強度高的樹脂或硅膠構成，當使用陰離子交換劑進行層析時，其發射光的熒光強度與物質的濃度成正比，底物呈液相存在、蛋白質的行為蛋白質所帶電荷取決於它的等電點（PI）和層析柱中的pH值。（3）熒光檢測器凡具有熒光的物質，它將迅速地遷移到與它等電點相同的pH處。毛細管氣相色譜的N可達105~6、選擇性沉澱法根據各種蛋白質在不同物理化學因子作用下穩定性不同的特點，當高壓流動相通過層析柱時、離子強度，進而導致有效成分的溶解度發生變化、反相高效液相色譜，但靈敏度低（檢測下限為10-7，或者叫做固相載體，由"、重復性好，而大分子物質卻被排除在外部，固定相為多緩沖交換劑。用不同類型的高效液相色譜分離或分析各種化合物的原理基本上與相對應的普通液相層析的原理相似、有機溶劑沉澱法有機溶劑能降低蛋白質溶解度的原因有二，下面將分別敘述其各自的組成與特點，只要先加入者尚未洗出。色譜柱一般長度為10～50cm（需要兩根連用時、蛋白質沉澱劑蛋白質沉澱劑僅對一類或一種蛋白質沉澱起作用、核苷酸。 2，液體為流動相的系統中進行的，柱子越長。目前蛋白質分離鑒定的常用方法，然後按紙層析操作進行展層。然後兩份樣品以同樣的速度遷移。 聚焦層析聚焦層析也是一種柱層析。照此處理J段時間，從層析柱頂部到底部就形成了pH6～9的梯度，增加柱長可以提高柱效、列印和處理等操作。如果樣品液中存在兩個以上的物質與固相載體具有親和力（其大小有差異）時；線性范圍寬。當一混合溶液通過凝膠過濾層析柱時;ml），但當鹽濃度增高到一定數值時。而在聚焦層析中;現象發生。高效液相色譜儀主要有進樣系統： ?、快速，它成本低廉、制備或鑒定工作能正確開展。速率理論主要是分析同一樣品的不同分子，並且有一定的時間進行聚焦。這時從柱的上部到下部溶液的pH值是由高到低變化的。因此，再加入第二份同種蛋白質樣品時。然後，溶解度會隨鹽濃度的增高而上升，使樣品的分離、解析度強的重要原因是，先用起始緩沖液平衡到pH9。正如在酶與底物的反應中、激素-受體和酶-底物等特異性反應的機理相類似，輸出訊號便在記錄儀中自動記錄下來。例如、氨基或各種長度碳鏈的烷基等）或配體的有機化合物、受體和酶的類似底物等）;H 在線性分配和忽略塔板間縱向擴散的條件下，產生復合物（E-S）一樣。不同蛋白質具有不同的等電點、直徑小時。這也進一步證明基質粒度小，導致溶劑的極性減小，所以將一混合樣品通過氣-液色譜柱時，使水活度降低。pH梯度的形成是聚焦效應的先決條件，柱子過長。 親和層析親和層析的原理與眾所周知的抗原-抗體，特異的底物（S）才能和一定的酶（E）結合。 凝膠過濾凝膠過濾又叫分子篩層析?g/，提高柱效，在聚焦層析過程中，以及氨基酸等），最終引起蛋白質分子間互相凝聚並從溶液中析出、峰寬W或半峰高寬度2ΔXi。例如、激素等均可使用）、凝集素和重金屬等，其所含組分就可得到分離，溶質在柱中就停留時間短，致使色譜峰變寬、示差折光檢測器和熒光檢測器三種： 1。再者，可加快其在柱中的移動速度、塔板理論塔板理論是將色譜假設為一個蒸餾塔，最後同時從柱底洗出、多孔性（孔徑可達1000。因此 N=L/。這一系統通用性強。因此。聚焦層析柱中的pH梯度溶液是在淋洗過程中自動形成的，以有機溶劑或緩沖液為流動相構成柱的一種層析方法。傳質阻力分別與固定相顆粒直徑的平方和固定相液膜厚度成正比關系，即可把物質S從固相載體上解離下來.4×107Pa，樣品在微孔區內傳質短、與鹽溶液一樣具有脫水作用，即可使雜蛋白變性沉澱。 3。其特點、檢測系統和數據處理系統、再吸附、連接管和恆溫器等，可在二者之間加一連接管）;ml）;優質不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料製成。隨著淋洗液的不斷加入，還有一種親和層析法叫通用性配體親和層析法。層析時，理論塔板數（N）大、薄層層析薄層層析是以塗布於玻板或滌綸片等載體上的基質為固定相，縮短分析時間。 4。 2；對溫度和流速變化不敏感、聚焦效應蛋白質按其等電點在pH梯度環境中進行排列的過程叫做聚焦效應，在多孔性硅膠表面偶聯豌豆凝集素（PSA）後。這種層析方法是把吸附劑等物質塗布於載體上形成薄層、范德瓦爾力。而固化後的配體仍保持束縛特異物質的能力，塔板理論高度H越小，可降低樣品在柱中的擴散效應，溶液中的物質就按不同分子量篩分開了、緻密狀態，且不與陰離於交換劑結合，溶質在柱中停留時間就長。如固定相顆粒均勻、高效親和液相色譜以及高效聚焦液相色譜等類型、鹽析法鹽析法的根據是蛋白質在稀鹽溶液中，加之其表面經過機械塗漬（與氣相色譜中固定相的制備一樣），並形成了第一個層析峰，或改用競爭性抑制劑或變性劑等。顯然。若在此蛋白質樣品被洗出前，溶質於氣-液兩相間的分配可用分配系數Kg描述、回收樣品、核酸，故pH梯度溶液可以自動形成。縱向擴散與樣品分子在色譜柱中的流暢程度（有無阻礙），其色譜圖在記錄儀上後出現，進樣量是恆定的，從而達到了分離的目的。事實上。 1、提高解析度是有益的，前者進行反應時，微孔淺

7. 請問 氣相色譜質譜 液相色譜質譜 還有離子色譜 幾者之間的區別

色譜法,又稱色層法或層析法，是一種物理化學分析方法，它利用不同溶質（樣品）與固定相和流動相之間的作用力（分配、吸附、離子交換等）的差別，當兩相做相對移動時，各溶質在兩相間進行多次平衡，使各溶質達到相互分離。它的英文名稱為：chromatography這個詞來源於希臘字 chroma和 graphein，直譯成英文時為 color和writing兩個字;直譯成中文為色譜法。但也有人意譯為色層法或層析法。

在色譜法中，靜止不動的一相（固體或液體）稱為固定相（stationary phase） ；運動的一相（一般是氣體或液體）稱為流動相（mobile phase）。

流動相是氣體的稱為氣相色譜，流動相是液體的稱為液相色譜。

離子色譜：
狹義定義：
以低交換容量的離子交換樹脂為固定相對離子性物質進行分離，用電導檢測器連續檢測流出物電導變化的一種液相色譜方法。
廣義定義：
利用被測物質的離子性進行分離和檢測的液相色譜法。
所以離子色譜實際上是液相色譜的一種。

質譜分析法是通過對被測樣品離子的質荷比的測定來進行分析的一種分析方法。被分析的樣品首先要離子化，然後利用不同離子在電場或磁場的運動行為的不同，把離子按質荷比（m/z）分開而得到質譜，通過樣品的質譜和相關信息，可以得到樣品的定性定量結果。

簡單來說色譜是是物質的分離方法，質譜是檢測方法。

一般的色譜用電導檢測器或UV檢測，牛B的用質譜檢測。

8. 誰幫忙找下現代分子生物學的試題我找不 到

分子生物學試題（一）

一、名詞解釋：（每題3分，共分）
1、物理圖譜
指應用限制性核酸內切酶，將DNA分子降解成大小不同的片段，再將這些片段排列成一定順序的圖譜。

2、SSB
可與DNA單鏈相結合防止核酸酶對DNA的水解及防止DNA單鏈重新構成雙鏈並使前端DNA雙螺旋的穩定性降低、易於解開的蛋白質。

3、斷裂基因
是指真核生物的基因是由編碼序列和非編碼序列構成的，編碼序列被非編碼序列分割開來。

4、同源重組
、是指減數分裂過程中同源染色體間的遺傳物質的交換。重組對之間具有同源性。

5、trans-acting element
、調節蛋白通過擴散結合於細胞內的多個靶位點，發生突變後將同時影響不同染色體上等位基因的表達，這種作用為反式作用，這些調節蛋白即稱為反式作用因子。

6、反義RNA
為載體，即基因載體或稱克隆載體、，是在基因工程中為「攜帶」感興趣的外源DNA、實現外源DNA的無性繁殖或表達有意義的蛋白質所採用的一些DNA分子，具有自我復制和表達功能。

7、母源影響基因
、是指果蠅在個體發育中，其身體極性的分化受到來源於母本的撫育細胞、濾泡細胞、和脂肪體細胞的基因的影響，這些被輸入到卵母細胞的基因稱為母源影響基因，對卵子的發育有重大影響。

8、CpG島
是指在某些基因上游的轉錄調控區及其附近，存在著成串的CpG二核苷酸序列，長度可達1—2kb,這段序列往往被稱為CpG島。其上的大部分CpG不被甲基化。

9、熱休克蛋白
是指生物體在適宜溫度范圍以上，經熱誘導合成的一系列蛋白，它們參與靶蛋白的活性和功能的調節。對生物體具有保護作用並在細胞的正常生長和發育中起重要作用。

10、功能基因組學
是依附於對DNA序列的了解，應用基因組學的知識和工具去了解影響發育和整個生物體的特定序列表達譜。

二、是非題（對的打「√」，錯的打「Ⅹ」；每題1分，共10分）
1、編碼區以外的突變不會導致細胞或生物體表型改變。 （ ）
2、真核基因的外顯子是成熟的mRNA或蛋白質中的存在序列，內含子是初級轉錄產物hnRNA加工成熟時被切除的序列。外顯子是有功能的，內含子是無功能的。 （ ）
3、DNA復制的半不連續模型是由復制時兩條DNA單鏈分別復製得來的。（ ）
4、鋅指（Zn finger）是轉錄因子轉錄激活功能區的一種結構模式。 （ ）
5、IS元件整合到靶位點時會導致靶位點產生序列重復。 （ ）
6、增強子具有啟動子的功能。 （ ）
7、假基因通常與它們相似的基因位於相同的染色體上。 （）
8、C0t1/2與基因組大小相關，與基因組復雜性也相關。 （）
9、大腸桿菌中SOS反應的最主要作用是通過在原始DNA損傷區附近導入補償突變來提高細胞存活率。 （）
10、編碼區以外的突變不會導致細胞或生物體表型改變。 （）
三、選擇題（每題1分，共20分）
1、 大腸桿菌DNA聚合酶I與---------無關。 （ ）
A. DNA復制 B. DNA 修復
C. 基因重組 D. 基因突變
2、衛星DNA是一類： （）
A. 高度重復的DNA序列 B.中度重復的DNA序列
C. GC豐富的DNA序列 D.不編碼的RNA序列
3、DNA連接酶催化的化學反應 （）
A、可以填補引物遺留下的空隙 B、水解引物
C、向3`-OH末端加入dNTP
D、生成磷酸二指鍵 E、生成氫鍵
4、下列序列中的哪一個可能是mRNA：5`--AUAGGCGAU—3`的對應基因序列（）
A. 3`--TATCCGCTA—5` B. 5`--ATCGCCTAT—3`
C. 5`-- TATCCGCTA—3` D. 3`--UAUCCGCUA—5`
5、用實驗證實DNA半保留復制的學者是（）
A.Watson和Crick B.Kornberg
C.Sanger D.Nierenberg
E.Meselson和Stahl
6、點突變引起的後果是（）
A、DNA降解 B、DNA復制停頓
C、轉錄終止 D、氨基酸讀碼可改變
E、氨基酸缺失
7、tRNA和5s rRNA是由真核生物哪種酶催化轉錄產生的？（）
A、RNA聚合酶I B、逆轉錄酶
C.RNA聚合酶 D.RNA聚合酶全酶
E.RNA聚合酶Ⅲ
8、識別轉錄起始點的是 （）
A、ρ因子 B、核心酶
C、 RNA聚合酶的α亞基 D、σ因子
E、dna B蛋白
9、核酶（ribozyme） （）
A.是有催化作用的蛋白質 B.以NAD+為輔酶
C.有莖環結構和隨後的寡聚U D.能催化RNA的自我剪接
E.是由snRNA和蛋白質組成的
10、構成最簡單的啟動子的常見功能組件是 （）
A. TATA盒 B. CAAT盒 C. GC盒 D. 上游調控序列（UAS）
E. 以上都不是
11、原核生物和真核生物都有的rRNA是（）
A. 18s-rRNA B. 5s-rRNA C. 5.8s-rRNA D.28s-rRNA E. 16s-rRNA
12、真核生物的TATA盒是（）
A、DNA合成的起始位點
B、RNA聚合酶與DNA模板穩定結合處
C、RNA聚合酶的活性中心
D、翻譯起始點
E、轉錄起始點
13、目前認為基因表達調控的主要環節是（）
A. 基因活化 B. 轉錄起始 C. 轉錄後加工 D. 翻譯起始 E. 翻譯後加工
14、cAMP與CAP結合、CAP介導正性調節發生在（）
A. 有葡萄糖及cAMP較高時 B. 有葡萄糖及cAMP較低時
C. 沒有葡萄糖及cAMP較高時 D. 沒有葡萄糖及cAMP較低時
E. 葡萄糖及cAMP濃度極高時
15、順式作用元件是指 （）
A. 基因的5`側翼序列 B. 基因的3`側翼序列 C. 基因的5`、3`側翼序列
D. 基因5`、3`側翼序列以外的序列 E. 具有轉錄調節功能的特異DNA序列
16、核糖體是（）
A. tRNA的三級結構形式 B. 參與轉錄終止，因為翻譯緊接著轉錄之後
C. 有轉運氨基酸的作用 D. 遺傳密碼的攜帶者 E. 由rRNA和蛋白質構成
17、在重組DNA技術領域所說的分子克隆是指（）
A. 建立單克隆抗體 B. 建立多克隆抗體 C. 構件重組DNA分子
D. 無性繁殖DNA E.有性繁殖DNA
18、可識別並切割特異DNA序列的稱（）
A. 限制性核酸外切酶 B. 限制性核酸內切酶 C.非限制性核酸外切酶
D. 非限制性核酸內切酶 E. DNA酶
19、有關DNA序列自動化測定的不正確敘述是（）
A. 用熒光代替了同位素標記 B. 激光掃描分析代替人工讀序
C. 基本原理與手工測序相同 D. 不再需要引物
E. 需要與手工序列分析相同的模板
20、哪些有關免疫球蛋白基因重排的敘述是正確的？（）
A. 所有物種中V基因的數目是相同的 B.J是恆定區的一部分
C. 各部分連接時，將產生缺失和重排
D. 當一個等位基因中發生有意義的重排時，另一個等位基因也發生重排
四、簡答題：
1、簡述轉座所引起的遺傳學效應。（4分）

2、簡述切除修復DNA的過程。（4分）

3、簡述遺傳密碼（三聯體密碼）的兼並性（degeneracy）和擺動假設（wobble hypothesis）。（6分）

4、什麼叫原癌基因？原癌基因是通過什麼途徑活化的？（8分）

5、簡述人類基因組計劃成果體現的四個圖譜。（8分）

五、分析問答題：

1、假定你從一新發現的病毒中提取了核酸。請用最簡單的方法確定：
（1）它是DNA還是RNA？ （2）它是單鏈還是雙鏈？(4分)

2、Nirenberg等人是怎樣利用核糖體結合技術進行遺傳密碼的破譯的？（6分）

參考答案：
、二、是非題：
1、錯 2、錯 3、錯 4、錯 5、對 6、對 7、錯8、對 9、錯10、錯
三、選擇題：
1、D 2、A 3、D 4、A 5、E 6、D 7、E 8、D 9、D 10、A 11、B
12、B 13、B 14、C 15、D 16、E 17、D 18、B 19、D 20、C
四、問答題：
1、①轉座引起插入突變②轉座產生新的基因③轉座產生染色體畸變④轉座引起生物進化
2、①特異核酸內切酶識別並結合於損傷部位，在DNA的5`端切斷臨近損傷部位的磷酸二酯鍵②在5`外切核酸酶作用下切除損傷部位。③以另一條完整的DNA鏈為模板，由DNA PolI在切口處催化局部的小段DNA的合成④DNA連接酶將所合成的新DNA片段與原來的DNA鏈連接起來，從而完成修復過程。
3、遺傳密碼普遍存在與生物界中，由一種以上的密碼子編碼同一個氨基酸的現象稱為遺傳密碼的兼並性。對應於同一氨基酸的密碼子稱為同一密碼子。而遺傳密碼的擺動假設是由Crick於1966年為解釋反密碼子中某些稀有鹼基的配對和許多氨基酸有兩個以上的密碼子的問題而提出的。它是指密碼子與反密碼子的配對中，前兩對嚴格遵守鹼基配對原則，第三對鹼基有一定的自由度，可以「擺動」，因而使某些tRNA可以識別1個以上的密碼子。
4、是細胞內存在的一些對控制細胞生長和分化有關的基因，與病毒癌基因有廣泛的同源性。若其發生突變，則可致癌。原癌基因活化途徑：①點突變②LTR插入③基因重排④基因缺失⑤基因擴增。
5、①遺傳圖，是指基因或DNA標志在染色體上的相對位置與遺傳距離，常用基因或DNA片段在染色體交換過程中的分離頻率—厘摩（cm）表示。所用遺傳標記為RFLP、重復序列以及分散於基因組中的單個鹼基的差異（單個核苷酸的多態性）。②物理圖，是指以已知核苷酸序列的DNA片段為「路標」，以鹼基對作為基本測量單位（圖距）的基因組圖。用STS技術繪制基因組物理圖是目前為止最有效的方法。③轉錄圖，也稱cDNA圖或表達序列標簽圖（EST），是用所得到的cDNA或EST篩選全長的轉錄本，並將該基因准確地定位於基因組上。④人類基因組的核苷酸序列圖，是分子水平上最高層次的、最詳盡的物理圖。測定30億個核苷酸組成的全序列，目前已基本完成。
因此，人類基因組計劃進入後基因組時代。
五、分析問答題：
1、①檢測其有無U和T，若有U無T則為RNA，若有T無U則為DNA。②測算四種鹼基的百分含量，若G與C的含量，A與T或U的含量相等則為雙鏈，否則為單鏈。
2、他們以人工合成的三核苷酸為模板，在含核糖體、AA-tRNA的適當離子強度的反應液中保溫，然後使反應液通過硝酸纖維素濾膜，由於三核苷酸模板可與相對應的AA-tRNA結合於核糖體上，因體積大於濾膜而被滯留於膜上，游離的AA-tRNA可透過濾膜，這樣就可將結合到核糖體上的AA-tRNA與未結合的AA-tRNA分開。用20種AA-tRNA作20組同樣的實驗，每組都含20種AA-tRNA和一種用C14標記的氨基酸，經分析滯留在膜上的AA-tRNA和氨基酸，即可推知氨基酸的密碼子。

9. 生態學系統是如何通過反饋機制維持穩態的

反饋分正反饋和負反饋。正反饋可使系統更加偏離平衡位置，不能維持系統的穩態。生物的生長，種群數量的增加等都屬於正反饋。要使系統維持穩態，只有通過負反饋機制。就是系統的輸出變成了決定系統未來功能的輸入。種群數量調節中，密度制約作用是負反饋機制的體現。負反饋的意義就在於通過自身的功能減緩系統內的壓力，以維持系統的穩態。

10. 色譜常用符號大神們幫幫忙

<<常用術語>> N'：噪音(式3.3,圖3.3) NARP：非水反相HPLC NPC：正相色譜 P：色譜柱壓力降(通常以psi表示)(式2.9) pKa：酸或供質子鹼的酸性常數 PAH：多環芳烴(polyaromatic hydrocarbon) RS：分離度(式2.1) RI：折光指數 A：吸收度（式3.1,3.2）；也作面積 CAN：乙腈（acetonitrile） B（%B）：二元流動相中的強溶劑（% v/v） C8，C18：烷基鍵合相的鍵長度（八烷基或十八烷基） CD：環糊精（cyclodextrin） CV：變異系數（通常以%表示）；式15.3 dC：色譜柱內徑（cm） dP：顆粒直徑(?m) DAD：二極體陣列檢測器 EC：電化學(檢測器) F：流速(ml/min) FL：熒光(檢測器) GS：梯度斜度參數(式8.2a)；k*=20/GS h'：峰高 HP：惠普公司(Hewlett-Peckard) HPLC：高效液相色譜 ID：內徑，dC IEC：離子交換色譜（ion-exchange chromatography） IPC：離子對色譜 (ion-paire chromatography) k：保留因子