微波蒸餾法
① pcr反應正確過程
本文介紹了 PCR 的詳細操作流程，強調了實驗中的注意事項，列舉了常用緩沖液的配方。幫助我們在理解實驗的基礎上更順利的操作。
聚合酶鏈式反應（Polymerase Chain Reaction，PCR）是體外合成雙鏈 DNA 的一種方法，其原理類似於天然 DNA的復制過程，其特異性主要依賴於與其目的片段兩端互補的特異引物和高特異性的酶（熱啟動酶） 。典型的 PCR反應有三個步驟：變性，退火，延伸，經過多次循環反應，獲得目的片段。
一．試劑准備
1.DNA 模板
2.特異性引物
3.dNTP Mix
4.PCR buffer
5.熱啟動酶
二．操作步驟
1.配置反應體系
將各成分依次加入到 0.5ml 的離心管中
擴增使用熱啟動酶，可在常溫下操作，非熱啟動型的酶要在低溫配置反應體系。
2.按照試劑盒說明書設置反應時間和溫度，擴增結束後電泳鑒定
3.瓊脂糖核酸電泳
· 將電泳所用器具蒸餾水洗凈，架好梳子
· 根據要分離的 DNA 片段大小制備合適濃度的瓊脂糖凝膠，准確稱取一定的瓊脂糖加入到錐形瓶中，加入 30ml 左右的電泳緩沖液（TAE 或 TBE）
· 在微波爐中加熱融化後冷卻至 40℃左右，充分混勻後倒入電泳槽中
· 室溫下凝固 40 分鍾左右，小心拔出梳子，將凝膠放置電泳槽中准備點樣
· 在電泳槽中加入電泳緩沖液，漫過凝膠表面即可，點樣孔內不要有氣泡
· 樣品點樣前准備好，（在八連管中）加入 5ul 樣品，1ul 的 6xLoding buffer 和 1ul 的染料混合，用搶將混合後的樣品緩緩注入到點樣孔中，注意不要串孔
· 按照正負極（紅正黑負），接通電源，電壓 40-60V，時間 30-40min，可根據溴酚藍的位置判斷是否終止電泳
· 電泳結束，關閉電源，凝膠成像觀察，並對比 marker 確定片段大小
不同的瓊脂糖濃度分離不同大小的 DNA 片段：
三．注意事項
引物
引物是決定 PCR 反應成敗的關鍵，要保證擴增的准確、高效，引物的設計要遵循如下原則：
1. 引物的設計在 cDNA 的保守區域，在 NCBI 上搜索不同物種的同一基因，通過序列分析的軟體，得到不同基因相同的序列就是該基因的保守區
2. 引物的長度：15-28bp，長度大於 38bp，會使退火溫度升高，不利於普通 Taq 酶的擴增
② 為什麼蒸餾水放到微波爐里加熱超過100度時不沸騰
因為它受熱均勻，各處溫度相同，不發生熱的傳遞，因此不沸騰。同時你可以知道水為什麼會沸騰。
PS:這里的沸騰並不是物理學裡面的水達到沸點，而是水的上下翻滾