lb培養基用蒸餾水
A. LB培養基如何配製
以配製一升培養基為例:
應該在950 ml去離子水中加入:
胰蛋白腖10g
酵母提取物5g
NaCl 10g
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配置原則:
1、選擇適宜的營養物質
就微生物主要類型而言,有細菌、放線菌、酵母菌、黴菌、原生動物、藻類及病毒之分,培養它們所需的培養基各不相同。
在實驗室中常用牛肉膏蛋白腖培養基(或簡稱普通肉湯培養基)培養細菌,用高氏I號合成培養基培養放線菌,培養酵母菌一般用麥芽汁培養基,培養黴菌則一般用查氏合成培養基。
2、營養物質濃度及配比合適
培養基中營養物質濃度合適時微生物才能生長良好,營養物質濃度過低時不能滿足微生物正常生長所需,濃度過高時則可能對微生物生長起抑製作用。
另外,培養基中各營養物質之間的濃度配比也直接影響微生物的生長繁殖和(或)代謝產物的形成和積累,其中碳氮比(C/N)的影響較大。嚴格地講,碳氮比指培養基中碳元素與氮元素的物質的量比值,有時也指培養基中還原糖與粗蛋白之比。
3、控制pH條件
培養基的pH必須控制在一定的范圍內,以滿足不同類型微生物的生長繁殖或產生代謝產物。各類微生物生長繁殖或產生代謝產物的最適pH條件各不相同,一般來講,細菌與放線菌適於在pH7-7.5范圍內生長,酵母菌和黴菌通常在pH4.5-6范圍內生長。
值得注意的是,在微生物生長繁殖和代謝過程中,由於營養物質被分解利用和代謝產物的形成與積累,會導致培養基pH發生變化,若不對培養基pH條件進行控制,往往導致微生物生長速度下降或(和)代謝產物產量下降。
4、控制氧化還原電位(redox potential)
不同類型微生物生長對氧化還原電位(F)的要求不一樣,一般好氧性微生物在F值為+0.1V以上時可正常生長,一般以+0.3一+0.4V為宜,厭氧性微生物只能在F值低於+0.1V條件下生長,兼性厭氧微生物在F值為+0.1V以上時進行好氧呼吸,在+0.1V以下時進行發酵。
5、原料來源的選擇
在配製培養基時應盡量利用廉價且易於獲得的原料作為培養基成分,特別是在發酵工業中,培養基用量很大,利用低成本的原料更體現出其經濟價值。
6、滅菌處理
要獲得微生物純培養,必須避免雜菌污染,因此對所用器材及工作場所進行消毒與滅菌。對培養基而言,更是要進行嚴格的滅菌。對培養基一般採取高壓蒸汽滅菌,一般培養基用1.05kg/cm2,121.3℃條件下維持15-30min可達到滅菌目的。
在配製培養基過程中,泡沫的存在對滅菌處理極不利,因為泡沫中的空氣形成隔熱層,使泡沫中微生物難以被殺死。因而有時需要在培養基中加入消泡沫劑以減少泡沫的產生,或適當提高滅菌溫度。
B. 合成培養基中蒸餾水的作用是什麼
任何生命的生存都離不開水啊!水可以保證生命體的正常代謝參加一些反應,維持滲透壓,給各種生化反應提供條件。
C. LB培養基配方
LB培養基是一種培養基的名稱,生化分子實驗中一般用該培養基來預培養菌種,使菌種成倍擴增,達到使用要求.可分為液體培養基和固體培養基。
液態培養基
根據《分子克隆實驗指南》(J.薩姆布魯克D.W.拉塞爾著)配製每升培養基,應該在950 ml去離子水中加入:
胰蛋白腖10g
酵母提取物5g
NaCl 10g
搖動容器直至溶質溶解.用5mol/LNaOH調pH至7.0.用去離子水定容至1L.在15psi高壓下蒸汽滅菌21min.
培養的菌種一般是經過改造的無法在外界環境單獨存活和擴增的工程菌.通過培養工程菌,我們可以表達大量的外源蛋白,也可以拿到帶有外源基因的質粒,工程菌的有效擴增是生化分子實驗的基礎。
LB培養基的配方如下:
胰蛋白腖(Tryptone) 10g/L
酵母提取物(Yeast extract) 5g/L
氯化鈉(NaCl) 10g/L
另外根據經驗值用NaOH調節該培養基的pH,使其達到7.4(該pH適合目前使用最廣的原核表達菌種E.coli的生長)
固態培養基
LB固體培養基1L和液體一樣,加15g~20g瓊脂粉,一定要在溫度降下之前加好抗生素,並且倒好板。
D. PH6.1的LB液體培養基的配製
1.稱量:准確稱取各成分。蛋白腖0.5g,酵母提取物0.25g,氯化鈉0.5g,加水50ml。配置LB固體培養基時還需加1g瓊脂。
2.溶化:加熱熔化,用蒸餾水定容到50mL。配置LB固體培養基時還需加瓊脂,整個過程不斷用玻棒攪拌,目的是防止瓊脂糊底而導致燒杯破裂。
3.調pH:將pH調至6.1。
4.滅菌:在兩個250ml的三角瓶中分別裝入50ml LB液體培養基和50ml LB固體培養基,加上棉塞。將培養皿用牛皮紙包好,放入滅菌鍋內,1kg壓力滅菌15min。
5.倒平板:滅菌後,待固體培養基冷卻至60℃左右時在酒精燈火焰附近操作進行。其過程是:
①將滅過菌的培養皿放在火焰旁,右手拿裝有培養基的三角瓶,左手拔出棉塞;
②右手拿三角瓶,使三角瓶的瓶口迅速通過火焰;
③用左手將培養皿打開一條稍大於三角瓶口的縫隙,右手將培養基倒入培養皿,立刻蓋上皿蓋;
④待平板冷卻凝固後,將平板倒過來放置。
倒過來放置的目的是防止培養基冷卻過程中形成的水滴落到培養基表面。向培養皿中轉移已滅菌的培養基時,也不要把培養基沾在皿壁上。否則,空氣中雜菌會在這些粘附培養基上繁殖,並污染皿內培養基。
E. 請問LB培養液是什麼
LB培養液是培養細菌常用的液體培養基.
配方是:
胰蛋白腖(Tryptone) 10g/L
酵母提取物(Yeast extract) 5g/L
氯化鈉(NaCl) 10g/L
蒸餾水
將上述配方加到燒瓶中,高溫高壓滅菌後即可使用.
F. 我要配含卡那黴素的LB培養基,請問卡那黴素如何配,需要用濾器過濾嗎如需配用蒸餾水還是去離子水配
卡那黴素100mg溶到10ml水,-20度保存,我一般不用濾器,沒什麼問題,去離子水就可以啊
G. 培養基怎樣出去蒸餾水
放在37度烘箱里一段時間,既可以檢查培養基的滅菌是否徹底,又可以使裡面的水分消失,一舉兩得。
H. 為什麼配培養基加蒸餾水
蒸餾水內沒有營養物資,只是單純的水,而瓊脂也只是將培養基固體話的東西,不屬於營養源,這兩個東西都沒有為微生物提供營養,無法供其生長,所以不能作為培養基。
I. 關於LB液體培養基
根據本人經驗:酵母浸膏和酵母浸粉都用來做N源,可以相互替代,浸膏的效果好於浸粉,但稱量比較困難。因為發酵是一個比較精密的工藝,建議還是稱準的好,給你提供個用過的辦法:取稱量紙一張將浸膏「逐漸」加在紙上,盡量不要加多,否則很麻煩,之後將稱量好的浸膏和紙一同放入盛少許水的三角平或燒杯中,稍許加熱,稱量紙就會很容易地與浸膏分離,進入水中,用鑷子將稱量紙取出,把溶液加入LB培養基中,即可。呵呵,一點經驗,希望能對你有所幫助。
J. 求助如何用LB培養基培養大腸桿菌或金黃葡萄球菌
LB瓊脂培養基用於一般細菌培養,特別用於分子生物學試驗中大腸桿菌的保存和培養。
原 理:
蛋白腖、酵母膏粉提供氮源、維生素和生長因子;氯化鈉維持均衡的滲透壓;葡萄糖提供碳源;瓊脂是培養基的凝固劑。
配方(每升):
蛋白腖 10g
酵母膏粉 5g
氯化鈉 5g
葡萄糖 1g
瓊脂 15g
最終pH7.0±0.2
使用方法:
1、 稱取本品36g,加入蒸餾水或去離子水1 L,攪拌加熱煮沸至完全溶解,分裝三角瓶,121℃滅菌15min,待冷至50℃左右傾注平板,備用。
2、取待檢菌接種於平板或斜面上於36±1℃培養24h。
3、觀察結果。
質量控制:
下列菌株接種後於36±1℃培養24h結果如下。