培養基母液中加入蒸餾水的原因

1. 【緊急】植物細胞工程 脫分化時向培養基中加入適宜濃度的蔗糖溶液 而不用蒸餾水的原因 有沒有供給營養

蔗糖可以維持滲透壓平衡，提供碳源

2. 配置培養基母液時為什麼要按順序加入各種葯品

大量元素原則上是可以混在一起溶解，硫酸鎂和氯化鈣一定要單獨溶解，因為高濃度的鈣離子和鎂離子在磷酸鹽中混合，會產生不溶解性沉澱，所以要分開溶解到最後定容。
而氯化鈣雖然可溶於水，但是在熱水中可以可以更好溶解。一般用個的一次蒸餾水是含有二氧化碳的但是這個對一般組培影響不大，可以不考慮除去。

3. 為什麼配培養基加蒸餾水

蒸餾水內沒有營養物資，只是單純的水，而瓊脂也只是將培養基固體話的東西，不屬於營養源，這兩個東西都沒有為微生物提供營養，無法供其生長，所以不能作為培養基。

4. 培養基的母液的化學成分主要是什麼，用量是多少

培養基（Medium）是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配製的養料，一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽（包括微量元素）以及維生素和水等。有的培養基還含有抗菌素和色素。
按所用原料不同，可分為兩類：應用肉湯、馬鈴薯汁等天然成分配製的，稱為天然培養基；應用化學葯品配成並標明成分的，稱為合成培養基或綜合培養基。化學試劑中的培養基，大多為合成培養基。由於液體培養基不易長期保管，現在均改製成粉末。培養基由於配製的原料不同，使用要求不同，而貯存保管方面也稍有不同。一般培養基在受熱、吸潮後，易被細菌污染或分解變質，因此一般培養基必須防潮、避光、陰涼處保存。對一些需嚴格滅菌的培養基（如組織培養基），較長時間的貯存，必須放在2~6。C的冰箱內。

常見培養基有：

1、細菌培養基

配方一 牛肉膏瓊脂培養基
牛肉膏0.3克 ，蛋白腖1.0克，氯化鈉 0.5克，瓊脂 1.5克，
水 100毫升

在燒杯內加水100毫升，放入牛肉膏、蛋白腖和氯化鈉，用蠟筆在燒杯外作上記號後，放在火上加熱。待燒杯內各組分溶解後，加入瓊脂，不斷攪拌以免粘底。等瓊脂完全溶解後補足失水，用10%鹽酸或10%的氫氧化鈉調整pH值到7.2～7.6,分裝在各個試管里，加棉花塞，用高壓蒸汽滅菌30分鍾。

配方二 馬鈴薯培養基

取新鮮牛心（除去脂肪和血管）250克，用刀細細剁成肉末後，加入500毫升蒸餾水和5克蛋白腖。在燒杯上做好記號，煮沸，轉用文火燉2小時。過濾，濾出的肉末乾燥處理，濾液pH值調到7.5左右。每支試管內加入10毫升肉湯和少量碎末狀的干牛心，滅菌，備用。

配方三 根瘤菌培養基

葡萄糖 10克 磷酸氫二鉀 0.5克
碳酸鈣 3克 硫酸鎂 0.2克
酵母粉 0.4克 瓊脂 20克
水 1000毫升 1%結晶紫溶液 1毫升

先把瓊脂加水煮沸溶解，然後分別加入其他組分，攪拌使溶解後，分裝，滅菌，備用。

2、放線菌培養基

配方一 澱粉瓊脂培養基（高氏培養基）

可溶性澱粉 2克 硝酸鉀 0.1克
磷酸氫二鉀 0.05克 氯化鈉 0.05克
硫酸鎂 0.05克 硫酸亞鐵 0.001克
瓊脂 2克 水 100毫升
先把澱粉放在燒杯里，用5毫升水調成糊狀後，倒入95毫升水，攪勻後加入其他葯品，使它溶解。在燒杯外做好記號，加熱到煮沸時加入瓊脂，不停攪拌，待瓊脂完全溶解後，補足失水。調整pH值到7.2～7.4，分裝後滅菌，備用。

配方二 麵粉瓊脂培養基

麵粉 60克 瓊脂 20克
水 1000毫升
把麵粉用水調成糊狀，加水到500毫升，放在文火上煮30分鍾。另取500毫升水，放入瓊脂，加熱煮沸到溶解後，把兩液調勻，補充水分，調整pH值到7.4，分裝，滅菌，備用。

3、真菌培養基

配方一 薩市（Sabouraud』s）培養基

蛋白腖 10克 瓊脂 20克
麥芽糖 40克 水 1000毫升

先把蛋白腖、瓊脂加水後，加熱，不斷攪拌，待瓊脂溶解後，加入40克麥芽糖（或葡萄糖），攪拌，使它溶解，然後分裝，滅菌，備用。

本培養菌是培養許多種類真菌所常用的。

配方二 馬鈴薯糖瓊脂培養基

把馬鈴薯洗凈去皮，取200克切成小塊，加水1000毫升，煮沸半小時後，補足水分。在濾液中加入10克瓊脂，煮沸溶解後加糖20克（用於培養黴菌的加入蔗糖，用於培養酵母菌的加入葡萄糖），補足水分，分裝，滅菌，備用。

把這培養基的pH值調到7.2～7.4，配方中的糖，如用葡萄糖還可用來培養放線菌和芽孢桿菌。

配方三 黃豆芽汁培養基

黃豆芽 100克 瓊脂 15克
葡萄糖 20克 水 1000毫升

洗凈黃豆芽，加水煮沸30分鍾。用紗布過濾，濾液中加入瓊脂，加熱溶解後放入糖，攪拌使它溶解，補足水分到1000毫升，分裝，滅菌，備用。

把這培養基的pH值調到7.2～7.4，可用來培養細菌和放線菌。

配方四 豌豆瓊脂培養基

豌豆 80粒 瓊脂 5克
水 200毫升

取80粒干豌豆加水，煮沸1小時，用紗布過濾後，在濾液中加入瓊脂，煮沸到溶解，分裝，滅菌，備用。

4、食用菌菌種培養基

配方一 馬鈴薯—蔗糖--瓊脂培養基

20%馬鈴薯煮汁 1000毫升
蔗糖 20克 瓊脂 18克

把馬鈴薯洗凈去皮後，切成小塊。稱取馬鈴薯小塊200克，加水1000毫升，煮沸20分鍾後，過濾。在濾汁中補足水分到1000毫升，即成20%馬鈴薯煮汁。在馬鈴薯煮汁中加入瓊脂和蔗糖，煮沸，使它溶解後，補足水分，分裝，滅菌，備用。使用該培養基對pH值要求不嚴格，可以不測定。

配方二 綜合馬鈴薯培養基

20%馬鈴薯煮汁 1000 毫升

磷酸二氫鉀 3克 硫酸鎂 1.5克
葡萄糖 20克 維生素 10毫克
瓊脂 18克

先配製20%馬鈴薯煮汁，方法同上。在煮汁中加入上述各種組分，加熱溶解後補足水分，調整pH值到6。分裝，滅菌，備用。 該培養基用於培養和保存靈芝、平菇、香菇等食用菌菌種。

5.煙草的培養基
在植物組織培養時,通過調節IAA和CTK的比值能影響愈傷組織分化出根或芽.CTK/IAA高時,愈傷組織分化芽
CTK/IAA低時,分化根;CTK/IAA比例適中維持愈傷組織不分化

愈傷組織誘導培養基制備
以MS培養基母液為基礎,向潔凈鋁鍋中順序加入大量元素20×母液100mL,微量元素100×母液20mL,鐵鹽100×母液20mL ,維生素100×母液20mL,肌醇200×母液10mL,甘氨酸200×母液10mL,配製得MS培養基後,再加入0.5mg·L-1的BA8mL,0.5mg·L-1的NAA8mL.然後加入實際配製培養基體積約2/3-3/4的蒸餾水,加入40g蔗糖後攪拌使其溶化,用0.5mol·L-1的NaOH和0.5 mol·L-1的HCl調整pH值至5.8-6.0.加入14g瓊脂,將鋁鍋置於電爐上,攪拌加熱使瓊脂完全溶化,然後用蒸餾水定容至終體積2L,繼續加熱幾分鍾使之混合均勻後分裝於三角瓶中.

煙草葉片愈傷組織誘導
取一無菌培養皿,用解剖刀切取1-2片無菌苗葉片置於無菌培養皿中,並用解
剖刀將葉片切成2mm2左右的小片,然後將其接種於准備好的培養基上,每瓶接種
5小片,一共接種6瓶.接種後的三角平置於24條件下黑暗培養1周,然後在同
樣溫度下有光照和全黑暗下培養3周直至愈傷組織形成(兩種情況各置3瓶).觀
察愈傷組織誘導結果,統計愈傷組織誘導率.

器官分化及植株再生培養
將誘導的愈傷組織按類型分別轉入分化培養基上,置於連續光照,溫度20-22 C條件下培養3周,統計愈傷組織再生植株情況.

愈傷組織誘導的總體情況
煙草愈傷組織誘導培養4周後,愈傷組織基本形成,即排除因生長時間不夠而
未形成愈傷的情況.具體情況見表一中所示,6瓶培養物均有愈傷形成,且都未發
生污染,但誘導率幾乎各不相同.其中, 在光照條件下培養的3瓶平均愈傷誘導率為
60.0℅, 在黑暗條件下培養的3瓶平均愈傷誘導率為46.7%.由於實驗過程中,外植
體即煙草葉片取得偏小,接種時可能已有部分外植體的大部分細胞脫水死亡,使整
個實驗的愈傷組織誘導率偏低,愈傷塊偏小.

特殊培養基：

一 選擇性培養基
1酵母菌富集培養基
葡萄糖5% 尿素0.1% 硫化銨0.1% 磷酸二氫鉀0.25% 磷酸氫二鈉0.05% 七水合硫酸鎂0.1% 七水合硫酸鐵0.01% 酵母膏0.05%
孟加拉紅0.003% pH4.5
2 Ashby無氮培養基 富集好養自生固氮菌
甘露醇1% 磷酸二氫鉀0.02% 七水合硫酸鎂0.02% 氯化鈉0.02%
二水合硫酸鈣0.01% 碳酸鈣0.5%

二 鑒別培養基
EMB培養基，常用於鑒別E.coli
蛋白腖 10g 乳糖5g 蔗糖5g 磷酸氫二鉀2g 伊紅Y 0.4g 美藍0.065g
蒸餾水1000g pH7.2

分離海洋微生物的培養基配方

2216E培養基配方（固體培養基）
蛋白腖 5克
酵母膏 1克
磷酸高鐵 0.01克
瓊脂 15-----20克
陳海水 1000毫升
煮沸氫氧化納（5%）的溶液調PH值7.6—7.8

5. 配製ms培養基時加母液前為何要加入約3/4的蒸餾水

在實驗中常用的培養基，可將其中的各種成分配成10倍、100倍的母液，放入冰箱中保存版，用時可按權比例稀釋。配製母液有2點好處：一是可減少每次配製稱量葯品的麻煩，二是減少極微量葯品在每次稱量時造成的誤差。
因此使用時要稀釋，攪拌是為了稀釋均勻。

6. 合成培養基中蒸餾水的作用是什麼

任何生命的生存都離不開水啊！水可以保證生命體的正常代謝參加一些反應，維持滲透壓，給各種生化反應提供條件。

7. 為什麼要配製培養基母液

為了每次配養基方便，只需稀釋即可。

MS培養基的有機成分有甘氨酸、肌醇、煙酸、鹽酸硫胺素和鹽酸吡哆素。培養基中的有機成分原則上應分別單獨配製。配製直接用蒸餾水溶解，定容至1L，注意稱量時用電子分析天平。配製培養基時，每配1L培養基取此液10ml。

由於維生素母液營養豐富，因此貯藏時極易染菌。被菌類污染的維生素母液，有效濃度降低，並且易給後期培養造成傷害，不宜再用。

(7)培養基母液中加入蒸餾水的原因擴展閱讀：

注意事項：

配製大量元素母液時，某些無機成分如Ca2+、SO42－、Mg2+和H2PO4－等在一起可能發生化學反應，產生沉澱物。

為避免此現象發生，母液配製時要用純度高的重蒸餾水溶解，葯品採用等級較高的分析純，各種化學葯品必須先以少量重蒸餾水使其充分溶解後才能混合，混合時應注意先後順序。特別應將Ca2+、SO42－、Mg2+和H2PO4－等離子錯開混合，速度宜慢，邊攪拌邊混合。

8. 什麼是培養基母液

培養基（Medium）是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配製的養料，一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽（包括微量元素）以及維生素和水等。有的培養基還含有抗菌素和色素。
按所用原料不同，可分為兩類：應用肉湯、馬鈴薯汁等天然成分配製的，稱為天然培養基；應用化學葯品配成並標明成分的，稱為合成培養基或綜合培養基。化學試劑中的培養基，大多為合成培養基。由於液體培養基不易長期保管，現在均改製成粉末。培養基由於配製的原料不同，使用要求不同，而貯存保管方面也稍有不同。一般培養基在受熱、吸潮後，易被細菌污染或分解變質，因此一般培養基必須防潮、避光、陰涼處保存。對一些需嚴格滅菌的培養基（如組織培養基），較長時間的貯存，必須放在2~6。C的冰箱內。

常見培養基有：

1、細菌培養基

配方一 牛肉膏瓊脂培養基
牛肉膏0.3克 ，蛋白腖1.0克，氯化鈉 0.5克，瓊脂 1.5克，
水 100毫升

在燒杯內加水100毫升，放入牛肉膏、蛋白腖和氯化鈉，用蠟筆在燒杯外作上記號後，放在火上加熱。待燒杯內各組分溶解後，加入瓊脂，不斷攪拌以免粘底。等瓊脂完全溶解後補足失水，用10%鹽酸或10%的氫氧化鈉調整pH值到7.2～7.6,分裝在各個試管里，加棉花塞，用高壓蒸汽滅菌30分鍾。

配方二 馬鈴薯培養基

取新鮮牛心（除去脂肪和血管）250克，用刀細細剁成肉末後，加入500毫升蒸餾水和5克蛋白腖。在燒杯上做好記號，煮沸，轉用文火燉2小時。過濾，濾出的肉末乾燥處理，濾液pH值調到7.5左右。每支試管內加入10毫升肉湯和少量碎末狀的干牛心，滅菌，備用。

配方三 根瘤菌培養基

葡萄糖 10克 磷酸氫二鉀 0.5克
碳酸鈣 3克 硫酸鎂 0.2克
酵母粉 0.4克 瓊脂 20克
水 1000毫升 1%結晶紫溶液 1毫升

先把瓊脂加水煮沸溶解，然後分別加入其他組分，攪拌使溶解後，分裝，滅菌，備用。

2、放線菌培養基

配方一 澱粉瓊脂培養基（高氏培養基）

可溶性澱粉 2克 硝酸鉀 0.1克
磷酸氫二鉀 0.05克 氯化鈉 0.05克
硫酸鎂 0.05克 硫酸亞鐵 0.001克
瓊脂 2克 水 100毫升
先把澱粉放在燒杯里，用5毫升水調成糊狀後，倒入95毫升水，攪勻後加入其他葯品，使它溶解。在燒杯外做好記號，加熱到煮沸時加入瓊脂，不停攪拌，待瓊脂完全溶解後，補足失水。調整pH值到7.2～7.4，分裝後滅菌，備用。

配方二 麵粉瓊脂培養基

麵粉 60克 瓊脂 20克
水 1000毫升
把麵粉用水調成糊狀，加水到500毫升，放在文火上煮30分鍾。另取500毫升水，放入瓊脂，加熱煮沸到溶解後，把兩液調勻，補充水分，調整pH值到7.4，分裝，滅菌，備用。

3、真菌培養基

配方一 薩市（Sabouraud』s）培養基

蛋白腖 10克 瓊脂 20克
麥芽糖 40克 水 1000毫升

先把蛋白腖、瓊脂加水後，加熱，不斷攪拌，待瓊脂溶解後，加入40克麥芽糖（或葡萄糖），攪拌，使它溶解，然後分裝，滅菌，備用。

本培養菌是培養許多種類真菌所常用的。

配方二 馬鈴薯糖瓊脂培養基

把馬鈴薯洗凈去皮，取200克切成小塊，加水1000毫升，煮沸半小時後，補足水分。在濾液中加入10克瓊脂，煮沸溶解後加糖20克（用於培養黴菌的加入蔗糖，用於培養酵母菌的加入葡萄糖），補足水分，分裝，滅菌，備用。

把這培養基的pH值調到7.2～7.4，配方中的糖，如用葡萄糖還可用來培養放線菌和芽孢桿菌。

配方三 黃豆芽汁培養基

黃豆芽 100克 瓊脂 15克
葡萄糖 20克 水 1000毫升

洗凈黃豆芽，加水煮沸30分鍾。用紗布過濾，濾液中加入瓊脂，加熱溶解後放入糖，攪拌使它溶解，補足水分到1000毫升，分裝，滅菌，備用。

把這培養基的pH值調到7.2～7.4，可用來培養細菌和放線菌。

配方四 豌豆瓊脂培養基

豌豆 80粒 瓊脂 5克
水 200毫升

取80粒干豌豆加水，煮沸1小時，用紗布過濾後，在濾液中加入瓊脂，煮沸到溶解，分裝，滅菌，備用。

4、食用菌菌種培養基

配方一 馬鈴薯—蔗糖--瓊脂培養基

20%馬鈴薯煮汁 1000毫升
蔗糖 20克 瓊脂 18克

把馬鈴薯洗凈去皮後，切成小塊。稱取馬鈴薯小塊200克，加水1000毫升，煮沸20分鍾後，過濾。在濾汁中補足水分到1000毫升，即成20%馬鈴薯煮汁。在馬鈴薯煮汁中加入瓊脂和蔗糖，煮沸，使它溶解後，補足水分，分裝，滅菌，備用。使用該培養基對pH值要求不嚴格，可以不測定。

配方二 綜合馬鈴薯培養基

20%馬鈴薯煮汁 1000 毫升

磷酸二氫鉀 3克 硫酸鎂 1.5克
葡萄糖 20克 維生素 10毫克
瓊脂 18克

先配製20%馬鈴薯煮汁，方法同上。在煮汁中加入上述各種組分，加熱溶解後補足水分，調整pH值到6。分裝，滅菌，備用。 該培養基用於培養和保存靈芝、平菇、香菇等食用菌菌種。

5.煙草的培養基
在植物組織培養時,通過調節IAA和CTK的比值能影響愈傷組織分化出根或芽.CTK/IAA高時,愈傷組織分化芽
CTK/IAA低時,分化根;CTK/IAA比例適中維持愈傷組織不分化

愈傷組織誘導培養基制備
以MS培養基母液為基礎,向潔凈鋁鍋中順序加入大量元素20×母液100mL,微量元素100×母液20mL,鐵鹽100×母液20mL ,維生素100×母液20mL,肌醇200×母液10mL,甘氨酸200×母液10mL,配製得MS培養基後,再加入0.5mg·L-1的BA8mL,0.5mg·L-1的NAA8mL.然後加入實際配製培養基體積約2/3-3/4的蒸餾水,加入40g蔗糖後攪拌使其溶化,用0.5mol·L-1的NaOH和0.5 mol·L-1的HCl調整pH值至5.8-6.0.加入14g瓊脂,將鋁鍋置於電爐上,攪拌加熱使瓊脂完全溶化,然後用蒸餾水定容至終體積2L,繼續加熱幾分鍾使之混合均勻後分裝於三角瓶中.

煙草葉片愈傷組織誘導
取一無菌培養皿,用解剖刀切取1-2片無菌苗葉片置於無菌培養皿中,並用解
剖刀將葉片切成2mm2左右的小片,然後將其接種於准備好的培養基上,每瓶接種
5小片,一共接種6瓶.接種後的三角平置於24條件下黑暗培養1周,然後在同
樣溫度下有光照和全黑暗下培養3周直至愈傷組織形成(兩種情況各置3瓶).觀
察愈傷組織誘導結果,統計愈傷組織誘導率.

器官分化及植株再生培養
將誘導的愈傷組織按類型分別轉入分化培養基上,置於連續光照,溫度20-22 C條件下培養3周,統計愈傷組織再生植株情況.

愈傷組織誘導的總體情況
煙草愈傷組織誘導培養4周後,愈傷組織基本形成,即排除因生長時間不夠而
未形成愈傷的情況.具體情況見表一中所示,6瓶培養物均有愈傷形成,且都未發
生污染,但誘導率幾乎各不相同.其中, 在光照條件下培養的3瓶平均愈傷誘導率為
60.0℅, 在黑暗條件下培養的3瓶平均愈傷誘導率為46.7%.由於實驗過程中,外植
體即煙草葉片取得偏小,接種時可能已有部分外植體的大部分細胞脫水死亡,使整
個實驗的愈傷組織誘導率偏低,愈傷塊偏小.

特殊培養基：

一 選擇性培養基
1酵母菌富集培養基
葡萄糖5% 尿素0.1% 硫化銨0.1% 磷酸二氫鉀0.25% 磷酸氫二鈉0.05% 七水合硫酸鎂0.1% 七水合硫酸鐵0.01% 酵母膏0.05%
孟加拉紅0.003% pH4.5
2 Ashby無氮培養基 富集好養自生固氮菌
甘露醇1% 磷酸二氫鉀0.02% 七水合硫酸鎂0.02% 氯化鈉0.02%
二水合硫酸鈣0.01% 碳酸鈣0.5%

二 鑒別培養基
EMB培養基，常用於鑒別E.coli
蛋白腖 10g 乳糖5g 蔗糖5g 磷酸氫二鉀2g 伊紅Y 0.4g 美藍0.065g
蒸餾水1000g pH7.2

分離海洋微生物的培養基配方

2216E培養基配方（固體培養基）
蛋白腖 5克
酵母膏 1克
磷酸高鐵 0.01克
瓊脂 15-----20克
陳海水 1000毫升
煮沸氫氧化納（5%）的溶液調PH值7.6—7.8