过滤并灭菌
A. 微孔滤膜的灭菌方法有哪些
（1）加热灭菌法
利用高温来杀死微生物（超过最高生长温度）的方法。加热灭菌的原理：当高温作用于微生物时，首先引起细胞内生理生化反应速率加快，机体内对温度敏感的物质如蛋白质、核酸等，随着温度的增高而遭受不可逆的破坏，尽而导致细胞内原生质体的变化、酶结构的破坏，从而使细胞失去了生活机能上的协调，停止了生长发育。随着高温的继续作用，细胞内原生质便发生凝固，酶结构完全破坏，活动消失，生化反应停止，渗透交换等新陈代谢活动消失，细胞死亡。加热灭菌可分干热灭菌和湿热灭菌两大类。
1）干热灭菌 利用灼烧或干热空气灭菌而没有饱和水蒸气参加的灭菌法称为干热灭菌法。由于干热灭菌使用方便，方法简单，故在生产上广泛应用。如火焰灭菌法：直接利用火焰把微生物烧死，故又称焚烧灭菌法。采用此法灭菌既彻底又迅速，但只适用于金属制的接种工具、试管口及污染物品等的处理。热空气灭菌法：即在电热恒温干燥箱中利用干热空气来灭菌。
2）湿热灭菌 即利用蒸汽进行灭菌的方法。湿热灭菌又分为高压、常压、间歇灭菌和巴氏灭菌4种。
①高压蒸汽灭菌 由于高压蒸汽具有较强的穿透力和较常压高的温度，能大大缩短灭菌时间，提高工作效率，加之蛋白质在湿热条件下容易变性，在热蒸汽条件下，细菌的芽孢在120℃，经20～30分钟可全部被杀死。如灭菌材料体积较大，不易被穿透时，可将压力增加到0.152兆帕，延长至1～2小时。在高压蒸汽灭菌中，灭菌温度随蒸汽压力的增加而升高（图2-6）。
图2-7 简易常压灭菌法
③常压间歇蒸汽灭菌法 这是利用常压蒸汽反复几次灭菌的方法。具体做法是将待灭菌物品放在锅内，100℃处理1小时左右，杀死微生物的营养细胞，让其冷却至30℃左右，此时芽胞会萌发，再以同样方法加热处理，反复3次，可达到灭菌目的。该方法可用于不耐高温的药品、营养物、特殊培养基的灭菌。
④低温巴氏灭菌法 即在60～70℃下，经一定时间，杀死有害微生物的方法。适应于不耐高温的物品消毒。有些培养基，在高温下遭到破坏，用此法既可杀死致病微生物的营养体，又能使培养基的成分不致受到严重破坏。食用菌生产中培养料堆积发酵工艺，就是利用这个原理杀死其中的病虫、杂菌。
（2）过滤除菌法
又分液体过滤和空气过滤两种，就是采用机械的方法，设计一种滤孔比细菌还小的筛子，做成各种过滤器，通过机械过滤，只让液体培养基或空气从筛孔流出，各种微生物菌体则留在筛子上，从而达到除菌的目的。这种方法适用于对热不稳定的体积小的液体培养基（如动物血清、蛋白质、酶、维生素等）及气体的灭菌。超净工作台的工作原理就是将带菌空气通过过滤灭菌形成无菌空气，从风洞中吹出，来造成工作台范围的无菌状态。过滤灭菌的最大优点是不破坏培养基中各种物质的化学成分。常用的过滤器有用硅藻土制的、石棉制的、陶瓷土制的，也有用火棉胶、硝化纤维素滤膜制成的。
（3）辐射灭菌法
利用辐射产生的能量进行杀菌的方法称辐射灭菌。辐射可分电离辐射和非电离辐射两种，α-射线、β-射线、γ-射线、X-射线、中子和质子、微波等属电离辐射，紫外线、臭氧、日光为非电离辐射。
1）紫外线灭菌 紫外线杀菌的原理是利用紫外线的辐射作用。用灯管直接照射细菌使其发生光化学反应，将细菌细胞质诱导形成胸腺嘧啶双聚体，从而抑制DNA的复制而发生变性、致死。另一方面，空气在紫外线照射下产生的臭氧（O3），也具有一定的杀菌作用。紫外线的有效作用距离为1.2～2.0米。紫外灯一般悬吊在接种室或培养室的上方，个数依房间大小而定，容1～2个人操作的接种室，安装一个30瓦的紫外灯就可以了。在每次接种前，应将所需的器具一起放入接种室（箱）内，然后打开紫外灯照射。如果接种室体积较大，开灯照射2小时才能达到灭菌效果；如果较小，只需开灯半小时左右既可达到灭菌效果。由于紫外线穿透力弱，即使是普通玻璃也不能滤过，因此，只适于空气或物体表面的灭菌。紫外线对人体皮肤，尤其是眼睛有杀伤作用，应避免直视，工作时应将紫外灯关闭。紫外线消毒时工作场所如果处在稍暗无光的情况下，能提高杀菌效果。细菌接受致死量紫外线照射后，随即给予可见光照射，部分细菌有复活的可能。干细胞比湿细胞对紫外线的抗性强，孢子比其营养细胞对紫外线更具抗性。
2）微波灭菌 由于微生物的细胞中都含有70%～90%的水分，水分子在微波电场中被极化，并随着电场方向的改变而转动，在转动过程中分子之间高速度摩擦产生热能，这种热能不同于外部加热，可在短时间里使细胞爆破而物体本身的温度却只有极微增加，从而达到灭菌效果。用YM7601型微波炉只需60秒钟就能杀死食品中192万个大肠杆菌。
3）臭氧发生器消毒 臭氧（O3）具有强烈的氧化作用，能破坏微生物的细胞膜与核酸。O3也是一种暂态物质，常温下能自然分解，还原成氧。其灭菌原理实际上和紫外线消毒极相似。
B. 过滤器过滤完东西要用什么来清洗灭菌
要看你是什么过滤器，一般用清水清洗就可以了，可用次氯酸钠进行杀菌。用于水处理的过滤器如污堵严重或压差过大，建议您更换过滤器内部滤材。
C. 请问制备培养基时如何过滤除菌
1、灭菌方法
培养基的灭菌方法主要有两种，高压除菌及0.22um微孔滤膜过滤除菌。与过滤相比，高压灭菌的工作强度小，成本较低，但易造成营养成分的流失，而且在多次加样（无菌谷氨酰胺溶液，无菌碳酸氢钠溶液等）过程中容易造成二次污染。大多数培养基采用0.1～0.2μm孔径的微孔滤膜进行过滤灭菌，并且已成为培养基除菌的发展方向，它可低限度地减少培养基的营养损失。
1.1 高压灭菌
某些培养基（如MEM）可进行高压灭菌，例如清大天一的MEM培养基中的MD605、MD609等。这类培养基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氢钠，一般是在培养基高压灭菌后加入L-谷氨酰胺和碳酸氢钠的无菌的液体。另外可高压的谷氨酸盐（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）可代替L-谷氨酰胺。
可高压灭菌的培养基在121℃、15psi，15分钟的条件下完全可达到灭菌效果及营养成分的最小损失，不需将灭菌时间延长。为保证高压灭菌的效果，灭菌设备的验证很关键。
1.2 过滤灭菌
可供过滤灭菌使用的滤膜很多，其材料多为polyethersulphone（PES）、尼龙、多聚碳酸盐、醋酸纤维素、硝酸纤维素、PTFE、陶瓷等。一般情况下采取正压过滤，正压过滤较之负压过滤具有流速高、过滤快、不易污染，可避免蛋白质产生大量气泡等优点。一般使用过滤器可参照各供应商的产品说明书。
目前大多数实验室和制药企业采用微孔滤膜滤器（如Zeiss滤器）或立式微孔滤器（Millipore、Pall）除菌。微孔滤膜滤器为不锈钢，中间可夹放0.22um滤膜。使用这种滤器最重要步骤是安装滤膜及无菌过滤过程。如在使用Zeiss滤器时，先要用培养用水将滤膜充分润湿，在安装滤膜时可在其上放置一层定性滤纸再固定。消毒时旋钮不要扭太紧，凡与空气接触部位都要包好（可用牛皮纸、纱布、无纺布等）；高压灭菌后，在无菌环境中立即将旋钮扭紧。过滤除菌结束后，要打开滤器，检查滤膜是否完整，如果滤膜破裂，需重新进行过滤除菌过程。立式微孔滤器可以选用不同的微孔滤柱体积，因为滤膜的折叠，膜面积显著增大，液体处理量大，而且不容易发生堵塞现象。
D. 过滤法是消毒和灭菌
消毒 是指杀复死病原微生物、但不一制定能杀死细菌芽孢的方法.通常用化学的方法来达到消毒的作用.用于用于消毒的化学药物叫做消毒剂.灭菌 是指把物体上所有的微生物（包括细菌芽孢在内）全部杀死的方法,通常用物理方法来达到灭菌的目的.防腐 是指防止或抑制微生物生长繁殖的方法.用于防腐的化学药物叫做防腐剂.无菌 不含活菌的意思,是灭菌的结果.防止微生物进入机体或物体的操作技术称为无菌操作.
E. 空气总过滤器和分过滤器如何灭菌
总过滤器灭菌时，一定要保证蒸汽的压力，使用压力一定要在0.3~0.4 MPa之间，灭菌过程中过滤器的表压应在0.15~0.20 MPa左右。中小型过滤器一般保压45~60 min，总过滤器（一级过滤器）保压时间为1.5~2 h。对于新装介质的过滤器，灭菌时间应适当延长一些，一般延长15~20 min。灭菌后要用压缩空气将介质吹干，吹干时间可根据介质的吸水性质和过滤器的规模而定。玻璃纤维吹干时间略短，棉花介质稍长，中小型过滤器吹干时间在1~2 h，大型过滤器可达2~4 h。用压缩空气吹时，气流要适当，太小吹不干，过大容易将介质顶翻，造成空气走短路而带菌。
F. KRBB配置后如何灭菌是高压灭菌还是过滤除菌
KRBB液的配方是：NaCl 118.5mmol/L, CaCl2 2.54mmol/L, KH2PO4 1.19mmol/L, KCl 4.74mmol/L, NaHCO325mmol/L, MgSO4 1.19mmol/L, HEPES 10mmol/L, BSA 1%)。
而10mmol/L HEPES缓冲液配制方法如下：准确称取HEPES 2.383g，加入新鲜三蒸水定容至1L。过滤除菌，分装后4℃保存。
BSA是牛血清白蛋白，也是需要过滤除菌的。
所以，你可以将能灭菌的盐类先高压灭菌，不能灭菌的后两样溶液过滤除菌，然后在混匀使用。
或者干脆直接全部都过滤除菌，不过这样的话工作量就大了。
G. 过滤灭菌的过程怎么做
过滤灭菌跟注射器的针头的装置一样
不过是个隔膜
通过压力吧要灭菌的液体通过滤膜
原理是：由于滤膜的孔径小于细菌的直径
所以能把细菌隔离在滤膜之外
这样除菌的~
H. 过滤灭菌法是什么过滤灭菌法如何操作的它根据的原理是什么
过滤灭菌跟注射器的针头的装置一样 不过是个隔膜 通过压力吧要灭菌的液体通过滤膜 原理是：由于滤膜的孔径小于细菌的直径 所以能把细菌隔离在滤膜之外 这样除菌的~
I. 过滤灭菌法是什么
过滤灭菌跟注射器的针头的装置一样不过是个隔膜 通过压力吧要灭菌的液体通过滤膜原理是：由于滤膜的孔径小于细菌的直径 所以能把细菌隔离在滤膜之外 这样除菌的~