超滤离心机离心时间
⑴ 80-2离心机 离心多久时间,转速多少
g是重力加速度(9.80665m/s#178;),rpm(转/分)是转速单位,一般用n表示转速,并不能直接转换。
可以通过转速及其他参数算出离心力,然后计算出离心力相对于重力加速度的倍数,记为相对离心力 Relative centrifugal force (RCF)
通过公式换算如下:
RCF=Flt;离心力;/Glt;重力;= mrω#178;/mg=rω#178;/g=r*(2π*n)#178;/g lt;注意:此处转速n应采用rps(转/秒)作为单位;
也可以记录为:Flt;离心力;是(RCF数值)个g的大小。
⑵ 超滤离心管怎么使用
蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管,常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管(MWCO10kD)。也有其它型号的、不同体积大小和MWCO超滤管可选,视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用。
1、选择合适的超滤管,主要考虑MWCO和浓缩体积,通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。
2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。
3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤(离心机预冷至4度)。膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。
4、当浓缩到剩下1ml时,【取50ul国产Bradford溶液,加入10ul流穿,看有没变蓝色,以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了,将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管,用5mg/ml的BSA离心10min,再取流穿,跑蛋白胶或Bradford粗测】,继续加入剩下的蛋白液浓缩(在冰上操作,防止蛋白受热),直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀,导致堵管。若发生沉淀,要确定沉淀的具体原因,是蛋白浓度过高还是Buffer不合适;前者可用多根超滤管同时超滤,降低浓度的办法解决,后者的方法是换不同的Buffer,直到蛋白不发生沉淀为止。
5、前面几步用以浓缩蛋白,如果要换Buffer,在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候,轻轻加入新的Buffer(经0.22um超滤膜超滤),再浓缩至1ml左右,连续三次,最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定,一般不多于500ul,也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算,三次达到1000倍以上,基本上可以达到换buffer的目的。
6、取出最终蛋白浓缩液的操作在冰上操作,用黄枪头(200ul)取,轻轻顺着边缘插入枪头,轻轻吹打、混匀蛋白液,注意不要碰到超滤膜,然后吸取浓缩液,每次吸接近200ul,直到吸完。管底剩下的最后一点浓缩液不必吸取,否则难度太大,有可能损坏超滤膜。最后加入MilliQ水到超滤管中,没过超滤膜,防止膜失水变干。
7、以下是处理超滤管,重复利用超滤管的步骤。
8、倒出超滤管里的水,用milliQ水轻轻润洗几次,【若管底有可见的蛋白沉淀,可以先加入水,然后用枪头吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉淀悬起,然后倒掉,不可用自来水猛冲】然后加入0.2M的NaOH溶液,室温放置20min,期间平衡超滤管。再离心10min。倒出残留的NaOH溶液,将管芯浸入MilliQ水的烧杯(1或2L)中,放置几个小时,再换新的水,放置几个小时,不断稀释NaOH浓度。50ml管和盖子用自来水洗,内壁再用MilliQ水洗干净。
9、取出浸没的管芯,加至接近满的MilliQ水,50ml管也加满MilliQ水,将管芯慢慢放入50ml
离心管,排出部分水,然后盖上盖子,放4度保存,直到下次使用。一般来说,按照上述步骤和注意事项,每根管用三四年不会坏。
⑶ 台式离心机离心时间越长离心效果越好吗
台式离心机作为分离率极高的沉降设备,具有运行稳定、生产能力强、工作效率高、易于维修保养等特点,降低了企业经营风险,因此受到了各行各业的欢迎。但要选择一款适合自己的离心机还是需要一定的经验!
台式离心机通过转头绕轴高速旋转所产生的强大离心力,根据不同物质在离心场中沉降速度的差异,使样品中不同性质的物质分离,以满足科研人员对实验样品的分析、分离要求。台式离心机的分离效果与很多因素有关,不可否认离心力和离心时间这两个是非常重要的。一般来讲,离心力越大,则离心效果越好。而在离心时间上,则是离心时间越长,离心效果越好。不过,需要知道的是,同等离心力下,当离心时间达到某些数值后,离心效果不会再提升,则是会保持不变。
⑷ 离心管和离心超滤管
离心管就是一个简单的可以承受高转速压力的管子,比如离一些样品,分离出上版清沉淀。
离心超滤管会权有一个类似于内管和外管的两个部分,内管中是带有一定分子量的膜,当高速离心时,分子量比它小的就漏到下面的管子(即外管)中了,分子量比它大的就截留在上面(即内管中),就是超滤的原理。。。。常用于浓缩样品。
⑸ 离心机离心时间对分离效果的影响大吗
实验室离心机的离心时间对分离效果的影响
对于离心机的分离效果,我们常常会考虑离心机种类,离心方法,离心介质等因素,但是在实际操作中,除了以上几点,离心机转速和离心时间以及离心介质的PH值和温度等条件也是很重要的,下面就为大家详细介绍一下后面三种因素对于分离效果的影响。
1、离心时间
实验室离心机的离心时间是影响离心效果十分重要的一个因素,离心方法的不同所需要的离心时间也会不同。下面以差速离心和等密度梯度离心以及密度梯度离心为例,详细介绍。对于差速离心来说,离心时间指的是某种颗粒完全沉降到离心管底的时间;而对于等密度梯度离心来说,离心时间则是指颗粒完全到达等密度点的平衡时间;zui后一个密度梯度离心的离心时间指的是形成界限分明的区带的时间。对于后面两种离心方法,其所需的区带形成时间或平衡时间,影响因素很复杂,可通过试验后确定。
2、离心转速
离心机的转速的大小主要由转子的转速和颗粒的旋转半径来决定,在说明离心条件时,往往也用相对离心力场来表示。实际工作中,离心力场的数据是指其平均值。即是指在离心溶液中点处颗粒所受的离心力场。
3、离心介质的PH值和温度
离心介质的PH值的设定一般是处于酶稳定的PH范围内,可采用缓冲液,在试验过称重,要避免过酸或者过碱的环境对离心机本身产生腐蚀作用。
在实验室离心机工作时,除了要格外注意对离心介质的选择之外,还要控制好温度及介质溶液的PH值等离心条件,防止其分离物质的凝集、变性和失活。一般来说,我们将离心温度会控制在4℃左右,对于某些热稳定性较好的酶等,离心也可在室温下进行。
离心机
⑹ 超滤离心管是什么
离心超滤管是一种采用优化过滤结构的设计方式,减少浓差极化,降低了膜易污染堵塞机率,加快了离心速度,缩短了离心所需的时间;超滤离心管还可用的膜表面面积提供快速样品处理。
⑺ 超滤离心管放一般的离心机能用么
般的离心机有两种转子,一种是吊篮式的转子,一种是角转子.当然两种都可以用来转超滤管浓缩,不过角转子效率会差很多,就是你离心时间长但浓缩体积还是不大.吊篮转子效率比较高一些.
⑻ 离心的转速和时间怎么决定
离心分离的效果除了与离心机种类、离心方法、离心介质及密度梯度等因素有关以外,实际操作时,主离心机转速和离心时间的确定、离心介质的PH值和温度等条件也至关重要。
(一)离心机的转速
离心加速度的大小取决于转子的转速和颗粒的旋转半径。在说明离心条件时,往往也用相对离心力场来表示。实际工作中,离心力场的数据是指其平均值。即是指在离心溶液中点处颗粒所受的离心力场。
(二)离心时间
离心时间依据离心方法的不同而有所差别。对于差速离心来说,是指某种颗粒完全沉降到离心管底的时间;对等密度梯度离心而言,离心时间是指颗粒完全到达等密度点的平衡时间;而密度梯度离心所需的时间则是指形成界限分明的区带的时间。对于密度梯度离心和等密度梯度离心所需的区带形成时间或平衡时间,影响因素很复杂,可通过试验后确定。
颗粒的沉降时间又称澄清时间,是指颗粒从离心样品液液面完全沉降到离心管底所需的时间。沉降时间决定于颗粒沉降速度和沉降距离。
(三)温度和PH值
为了防止分离物质的凝集、变性和失活,除了在离心介质的选择方面加以注意外,还必须控制好温度及介质溶液的PH值等离心条件。离心温度一般控制在4度左右,对于某些热稳定性较好的酶等,离心也可在室温下进行。但在超速或高速离心时,转子高速旋转会发热从而引起温度升高。故必须采用冷冻系统,使温度保持在一定范围内。
离心介质溶液的PH值应该是处于酶稳定的PH范围内,必要时可采用缓冲液。另外,过酸或过碱还可能引起转子和离心机的其他部件的腐蚀,应尽量避免。