离子交换层析法的优缺点
① 离子色谱法与比色法测定亚硝酸盐的区别优缺点各是什么
可用苯乙烯二乙烯苯树脂或十八烷基硅胶(ODS也有用C8硅胶或CN固定相流动相由含有所谓对离子试剂和含适量有机溶剂的水溶液组成,离子对色谱的固定相为疏水型的中性填料。对离子是指其电荷与待测离子相反,并能与之生成疏水性离子,对化合物的表面活性剂离子,用于阴离子分离的对离子是烷基胺类如氢氧化四丁基铵氢氧化十六烷基三甲烷等,用于阳离子分离的对离子是烷基磺酸类,如己烷磺酸钠,庚烷磺酸钠等对离子的非极性端亲脂极性端亲水,其CH2键越长则离子对化合物在固定相的保留越强,极性流动相中,往往加入一些有机溶剂,以加快淋洗速度,此法主要用于疏水性阴离子以及金属络合物的分离,至于其分离机理则有3种不同的假说,反相离子对分配离子交换以及离子相互作用。有3种分离方式,离子色谱的分离机理主要是离子交换。高效离子交换色谱(HPIC离子排斥色谱 HPIEC和离子对色谱 MPIC用于3种分离方式的柱填料的树脂骨架基本都是苯乙烯-二乙烯基苯的共聚物,但树脂的离子交换功能基和容量各不相同。HPIC用低容量的离子交换树脂,HPIEC用高容量的树脂,MPIC用不含离子交换基团的多孔树脂。3种分离方式各基于不同分离机理。HPIC分离机理主要是离子交换,HPIEC主要为离子排斥,而MPIC则是主要基于吸附和离子对的形成。离子交换色谱采用低交换容量的离子交换树脂来分离离子,高效离子交换色谱[4]应用离子交换的原理。这在离子色谱中应用最广泛,其主要填料类型为有机离子交换树脂,以苯乙烯二乙烯苯共聚体为骨架,苯环上引入磺酸基,形成强酸型阳离子交换树脂,引入叔胺基而成季胺型强碱性阴离子交换树脂,此交换树脂具有大孔或薄壳型或多孔表面层型的物理结构,以便于快速达到交换平衡,离子交换树脂耐酸碱可在任何pH范围内使用,易再生处理、使用寿命长,缺点是机械强度差、易溶易胀、受有机物污染。将有离子交换基的有机硅烷与基表面的硅醇基反应,硅质键合离子交换剂以硅胶为载体。形成化学键合型离子交换剂,其特点是柱效高、交换平衡快、机械强度高,缺点是不耐酸碱、只宜在pH2-8范围内使用。离子交换色谱是最常用的离子色谱。离子排斥色谱电离组分受排斥不被保留,主要根据Donnon膜排斥效应。而弱酸则有一定保留的原理,制成离子排斥色谱主要用于分离有机酸以及无机含氧酸根,如硼酸根碳酸根和硫酸根有机酸等。主要采用高交换容量的磺化H型阳离子交换树脂为填料以稀盐酸为淋洗液。
② 离子交换层析法原理是什么
离子交换层析法 (ion exchange chromatography,简称IEC)是从复杂的混合物中,分离性质相似大分子的方法之一,依据的原理是物质的酸碱性、极性,也就是所带阴阳离子的不同。电荷不同的物质,对管柱上的离子交换剂有不同的亲和力,改变冲洗液的离子强度和pH值,物质就能依次从层析柱中分离出来。
离子交换层析法大致分为5个步骤:
1. 离子扩散到树脂表面。
2. 离子通过树脂扩散到交换位置。
3. 在交换位置进行离子交换;被交换的分子所带电荷愈多,它与树脂的结合愈紧密,也就愈不容易被其它离子取代。
4. 被交换的离子扩散到树脂表面。
5. 冲洗液通过,被交换的离子扩散到外部溶液中。
离子交换树脂的交换反应是可逆的,遵循化学平衡的规律,定量的混合物通过管柱时,离子不断被交换,浓度逐渐降低,几乎全部都能被吸附在树脂上;在冲洗的过程中,由于连续添加新的交换溶液,所以会朝正反应方向移动,因而可以把树脂上的离子冲洗下来。
如果被纯化的物质是氨基酸类的分子,则分子上的净电荷取决于氨基酸的等电点和溶液的pH值,所以当溶液的pH 值较低,氨基酸分子带正电荷,它将结合到强酸性的阳离子交换树脂上;随着通过的缓冲液pH逐渐增加,氨基酸将逐渐失去正电荷,结合力减弱,最后被洗下来。由于不同的氨基酸等电点不同,这些氨基酸将依次被洗出,最先被洗出的是酸性氨基酸,如apartic acid和glutamic acid(在约pH3~4时),随后是中性氨基酸,如glycine和alanine。碱性氨基酸如arginine和lysine在pH值很高的缓冲液中仍带有正电荷,因此这些在约pH值高达10~11时才出现。
③ 离子交换层析与疏水层析有何区别
结合的作用力就不一样啊
离子交换层析是根据静电力不同而达到挂柱和洗脱的效果
而疏水层析是因为不同的物质与填料的疏水作用力不一样,洗脱时间不同,而达到分离的效果
④ 离子交换层析与疏水层析有何区别
离子交来换层析是利用蛋白自质在不同PH带不同种电荷的方法,利用离子交换的方法分离蛋白的。离子交换内的介质一般是树脂,阳离子交换型的,使用前树脂先用碱处理成钠型,将氨基酸混合液(pH=2-3)上柱,pH=2-3时,氨基酸主要以阳离子形式存在,与树脂上的钠离子发生交换而被“挂”在树脂上,再用洗脱剂洗脱。不同的氨基酸(带的电荷不同)与树脂的亲和力不同,要将其分离洗脱下来,需要降低它们之间的亲和力,方法是逐步提高洗脱剂的pH和盐浓度,这样各种氨基酸将以不同的速度被洗脱下来,反之亦然。不同反荷离子与树脂亲和力是不同的,其强弱关系为阳性竞争离子:Ag+〉CS+〉K+〉NH4+〉Na+〉H+〉Li+阴性竞争离子:I->NO3->(PO4)3->CN-〉HSO3-〉Mg2+〉HCO3-〉HCOO-〉CH3COO-〉OH-〉F-如果某种离子溶液洗脱效果不好,可用另一种亲和力强的离子代替之,等电点>7选择阳离子交换树脂,等电点<7选择阴离子交换树脂。
⑤ 离子交换色谱法的好处与坏处
离子交换色谱相对来说更广谱些,效率些,如同大网,原子的更细致些,如同小网
⑥ 什么样的组分适合用离子交换色谱法分析
所要成分具有酸碱基团,杂质不具有酸碱基团的物质。
或者所要成分为无酸碱基团的物质,杂质具有酸碱基团。
或者所要分离的物质一个有酸性基团一个具有碱性基团。
希望对您有所帮助!
⑦ 离子交换层析技术的要点
In protein isolation and purification, ion exchange chromatography is a key technique compared with other techniques.
⑧ 离子交换法的缺点
1.会产生过量的再生废液;
2.周期较长;
3.耗盐量大;
4.有机物的存在会污染离子交换树脂专;属
5.排出大量含盐废水易引起管道腐蚀。
此外,对于溶液中存在多种离子时,需要针对不同的目的离子选用不同的树脂,普遍适用性差。
⑨ 离子交换层析法分离纯化蛋白质有哪些局限性
因为离子交换吸附蛋白质并不是特异性吸附,在某些情况下可能难以判断结合的蛋版白质权是否为当初设计的目的蛋白。
离子交换吸附依赖于蛋白质表面的静电荷,如果蛋白质结构比较特殊,可能会有在各种pH都难以结合上离子交换层析的情况。
离子交换层析对于等电点与目标蛋白接近的杂蛋白并没有很好的分离效果。
⑩ 离子交换法有哪些优点
离子交换法用于净化抄和富集金属组分具有选择性好、作业回收率高、作业成本低、可以得到质量较高的化学精矿等许多优点,还可以从浸出矿浆中直接提取目的组分,亦可将浸出作业和吸附作业合在一起进行。以提高浸出率和省去固液分离作业。