废水中蛋白质的分离

1. 如何减少蛋白质分离纯化中减少蛋白质变性的机会

蛋白质变性影响因素：
1，一般温度高于60摄氏度持续一段时间会变性。不同蛋白耐受高温不同，具体问题具体分析。
2，高浓度有机溶剂，如丙酮，乙醚，巯基乙醇等。
3，含有蛋白酶环境会分解蛋白。
4，变性剂，如高浓度盐酸胍和尿素。，
5，盐溶液，在一定浓度盐作用下，会使蛋白中折叠在内部的疏水集团暴露而改变折叠结构。
6，pH值变化，强酸强碱条件下会破坏蛋白质结构。等电点时蛋白质沉淀。
。。。
因此，克服和避开上述内容可以减少变性。具体措施：
1，控制温度，pH值。避开强酸强碱和等电点。
2，尽量减少和有机溶剂和变性剂的接触。
3，添加蛋白酶抑制剂，可以减少蛋白分解。
4，盐浓度适宜，不能太高。
5，增加NMSF，N-马来酰亚胺，去氧胆酸钠等抗氧化物质，可以防止蛋白被氧化变性。
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2. 您好，废水中蛋白质的分离与纯化盐析要加入硫酸铵的量

其凝胶层复析用于测定蛋制白质量；4）吸附性质.主要离交换层析：称凝胶滤、电泳离蛋白质混合物各种主要根据蛋白质溶液性质,布于同液层离.见离提纯蛋白质：蛋白质高于或低于其pI溶液带净负或电荷.3：蛋白质溶液加入量性盐：利用混合物各组理化性质差异：利用透析袋膜超滤性质：1,电场移.6.凡能与水任意比例混合机溶剂,相互接触两相（固定相与流相）间布同进行离.2、氯化钠、超速离.5,蛋白质能进入孔内径直流、甲醇,均引起蛋白质沉淀.用性盐,同蛋白质离,蛋白质进入孔内,柱滞留间较：硫酸铵,经超速离,凝胶层析、盐析与机溶剂沉淀：1）.超速离用测定蛋白质量,溶液pH蛋白质等电点处效,破坏蛋白质胶体性质,称盐析、筛,乙醇；3）电荷；2）溶解度,蛋白质溶液加于柱顶部.4、硫酸钠等,吸附层析及亲层析等,使蛋白质溶液沉淀析、层析,蛋白质量与其沉降系数S比、透析.盐析.电泳迁移率主要取决于蛋白质所带电荷量及、丙酮等；5）其物亲力等进行离：利用物质密度同,物质与物质离,任其往渗漏

3. 如何从材料中分离出蛋白质

（一）水溶液提取法

稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂，通常用量是原材料体积的1-5倍，提取时需要均匀的搅拌，以利于蛋白质的溶解。提取的温度要视有效成份性质而定。一方面，多数蛋白质的溶解度随着温度的升高而增大，因此，温度高利于溶解，缩短提取时间。但另一方面，温度升高会使蛋白质变性失活，因此，基于这一点考虑提取蛋白质和酶时一般采用低温（5度以下）操作。为了避免蛋白质提以过程中的降解，可加入蛋白水解酶抑制剂（如二异丙基氟磷酸，碘乙酸等）。
下面着重讨论提取液的pH值和盐浓度的选择。
1、pH值
蛋白质，酶是具有等电点的两性电解质，提取液的pH值应选择在偏离等电点两侧的pH 范围内。用稀酸或稀碱提取时，应防止过酸或过碱而引起蛋白质可解离基团发生变化，从而导致蛋白质构象的不可逆变化，一般来说，碱性蛋白质用偏酸性的提取液提取，而酸性蛋白质用偏碱性的提取液。
2、盐浓度
稀浓度可促进蛋白质的溶，称为盐溶作用。同时稀盐溶液因盐离子与蛋白质部分结合，具有保护蛋白质不易变性的优点，因此在提取液中加入少量NaCl等中性盐，一般以0.15摩尔。升浓度为宜。缓冲液常采用0.02-0.05M磷酸盐和碳酸盐等渗盐溶液。
（二）有机溶剂提取法
一些和脂质结合比较牢固或分子中非极性侧链较多的蛋白质和酶，不溶于水、稀盐溶液、稀酸或稀碱中，可用乙醇、丙酮和丁醇等有机溶剂，它们具的一定的亲水性，还有较强的亲脂性、是理想的提脂蛋白的提取液。但必须在低温下操作。丁醇提取法对提取一些与脂质结合紧密的蛋白质和酶特别优越，一是因为丁醇亲脂性强，特别是溶解磷脂的能力强；二是丁醇兼具亲水性，在溶解度范围内（度为10%，40度为6.6%）不会引起酶的变性失活。另外，丁醇提取法的pH及温度选择范围较广，也适用于动植物及微生物材料。
二、蛋白质的分离纯化

4. 蛋白质分离纯化的四种方法

1、盐析法：

盐析法的根据是蛋白质在稀盐溶液中，溶解度会随盐浓度的增高而上升，但当盐浓度增高到一定数值时，使水活度降低，进而导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和，水化膜逐渐被破坏，最终引起蛋白质分子间互相凝聚并从溶液中析出。

2、有机溶剂沉淀法：

有机溶剂能降低蛋白质溶解度的原因有二：其一、与盐溶液一样具有脱水作用；其二、有机溶剂的介电常数比水小，导致溶剂的极性减小。

3、蛋白质沉淀剂：

蛋白质沉淀剂仅对一类或一种蛋白质沉淀起作用，常见的有碱性蛋白质、凝集素和重金属等。

4、聚乙二醇沉淀作用：

聚乙二醇和右旋糖酐硫酸钠等水溶性非离子型聚合物可使蛋白质发生沉淀作用。

(4)废水中蛋白质的分离扩展阅读：

蛋白质是生命的物质基础，是有机大分子，是构成细胞的基本有机物，是生命活动的主要承担者。没有蛋白质就没有生命。氨基酸是蛋白质的基本组成单位。它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质。

机体中的每一个细胞和所有重要组成部分都有蛋白质参与。蛋白质占人体重量的16%~20% ，即一个60kg重的成年人其体内约有蛋白质9.6~12kg。

人体内蛋白质的种类很多，性质、功能各异，但都是由20多种氨基酸（Amino acid）按不同比例组合而成的，并在体内不断进行代谢与更新。

5. 蛋白质分离器能处理多少程度的污水

蛋白质分离器原理：
空气和水之间所形成的接触表面，具有一定的表面张力，所以纤维素、蛋白素和食物残渣等有机杂质必然会在此被吸附汇集。事实上，如果能扩大此表面区域，例如产生气泡（制造泡沫），则会有更多的纤维素、蛋白素和食物残渣等在此表面被吸附。泡沫的粘度将随着表面的扩大而增强，以及气泡的逐渐消失而改变。因此，蛋分器的有效性就在于扩大气体和液体之间的表面区域以及其特定的表面张力。另一种理论是：有机分子表面有2个极端，一个是亲水，一个是不亲水，在与气泡接触时，亲水的极端被水分子吸引，这种表面活性特性促使有机微粒吸附于气泡表面并被聚集在一起。显然，蛋分器的处理需要一个接触反应灌，让空气和水在其中相互作用。
蛋分器是由接触室、充气装置、集污室、进排水、排污、臭氧加注、液位调整、冲洗装置等部分组成。
具体处理流程为：
需要处理的水体进入接触室的上部，水体向下移动，沿出口流走；射流注气装置产生的大量微细气泡形成巨大表面积进入到接触室，这些泡沫在接触室向上移动，在移动过程中，水体中悬浮的未溶解和溶解的蛋白微粒（有机物中的一种）聚集在微气泡表面，并堆积向上推动脱离出水体，最后进入顶部的集污室；在集污室中随着泡沫的慢慢破碎，有机污物在这里形成沉淀，然后由排污口排出。经过处理后的水沿主出水口流出，辅助出水口配有控制流速的阀门用于调整蛋分器的液位。这种逆流式的流程设计可非常有效的对水体进行处理。

6. 蛋白质分离中洗脱是啥意思

洗脱： 用溶液将吸附在分离柱上的蛋白质成分冲洗下来的过程叫洗脱。

7. 常用的蛋白质分离纯化方法有哪几种

分离蛋白质混合物的各种方法主要是根据蛋白质在溶液中的以下性质：1）分子大小；2）溶解度；3）电荷；4）吸附性质；5）对其它分子的生物学亲和力等进行分离.
常见的分离提纯蛋白质的方法有：1、盐析与有机溶剂沉淀：在蛋白质溶液中加入大量中性盐,以破坏蛋白质的胶体性质,使蛋白质从溶液中沉淀析出,称为盐析.常用的中性盐有：硫酸铵、氯化钠、硫酸钠等.盐析时,溶液的pH在蛋白质的等电点处效果最好.凡能与水以任意比例混合的有机溶剂,如乙醇、甲醇、丙酮等,均可引起蛋白质沉淀.2、电泳法：蛋白质分子在高于或低于其pI的溶液中带净的负或正电荷,因此在电场中可以移动.电泳迁移率的大小主要取决于蛋白质分子所带电荷量以及分子大小.3、透析法：利用透析袋膜的超滤性质,可将大分子物质与小分子物质分离开.4、层析法：利用混合物中各组分理化性质的差异,在相互接触的两相（固定相与流动相）之间的分布不同而进行分离.主要有离子交换层析,凝胶层析,吸附层析及亲和层析等,其中凝胶层析可用于测定蛋白质的分子量.5、分子筛：又称凝胶过滤法,蛋白质溶液加于柱之顶部,任其往下渗漏,小分子蛋白质进入孔内,因而在柱中滞留时间较长,大分子蛋白质不能进入孔内而径直流出,因此不同大小的蛋白质得以分离.6、超速离心：利用物质密度的不同,经超速离心后,分布于不同的液层而分离.超速离心也可用来测定蛋白质的分子量,蛋白质的分子量与其沉降系数S成正比.

8. 蛋白质的分离和提取个是什么步骤

一、基本原理
分离纯化蛋白质，首先要从原材料中提取目的蛋白，然后通过粗分离的方法除去大量杂质，最后进行精细分离，得到目的蛋白。本实验以新型基因重组人TNF为例阐明重组蛋白TNF的提取及初步分离。
TNF的提取是将发酵菌体裂解，在一定的条件和溶液中，使被提取的TNF充分释放出来，经离心收集混合液中提取的TNF成份的过程。含有TNF的提取溶液中，含有大量的杂蛋白，由于蛋白质在水溶液中的溶解度主要取决于蛋白质分子表面的水分子数目，即蛋白质表面亲水基团与水分子形成水化膜的程度和带电荷的情况，当中性盐如硫酸铵等加入蛋白质溶液时，由于中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质，使蛋白质分子周围的水化膜减弱或消失，蛋白质溶解度降低，同时由于中性盐的加入，蛋白质溶液的离子强度发生了改变，蛋白质表面电荷被大量中和，更加导致蛋白质溶解度降低，使蛋白质分子之间互相聚集而发生沉淀。不同的蛋白质由于其带电性，亲水性等性质的不同，会在不同浓度的盐中形成沉淀。依此原理可对混合蛋白质进行粗分离。该实验中利用硫酸铵盐析除去大部分杂蛋白从而使TNF得到初步纯化。
二、试剂配制
1、STE（25%蔗糖 10mmol/L Tris-HCl pH 8.5 1mmol/L EDTA）。
方法：取蔗糖250g，1mol/LTris.HCl10ml，0.5mol/L EDTA2ml，加水至1000ml115℃，20min高压灭菌。
2、1mol/L MgCl2。
方法：取MgCl2 203.30g，加水至1000ml。
3、Tris-HCl pH8.5。
方法：取Tris 121.14g，用HCL调pH至8.5，加水至1000ml（12mol/L HCl 约30ml）。
4、0．5mol/L EDTA pH8.5。
方法：取乙二氨四乙酸二钠186.12g，NaOH20g，加水至1000ml，在121℃下，进行20min高压灭菌。
三、
操作步骤
1、称取菌体重量，按5~10ml/g菌体加入STE溶液，搅拌至菌体完全悬浮。
2、按0.5~1mg/g菌体加入用STE溶液新鲜配制的溶菌酶溶液，用玻璃棒用力搅匀后于4℃环境中放置20min。此时菌液呈粘稠状。
3、按10mg/g菌体加入用STE溶液新鲜配制的脱氧胆酸钠（DOC）溶液，用力搅匀。
4、加入5~10ml 1mol/L MgCl2溶液，搅匀后加入约40μl Dnase I（25mg/ml）充分搅拌至菌液变稀。
5、15000rpm，4℃离心30min。
6、 取离心上清，精确量取其体积，测定蛋白质浓度，倒入置于冰浴的烧杯中，边搅拌边缓慢加入固体硫酸铵使其达到50%饱和度。待固体硫酸铵安全溶解后，静置于0℃环境中30min。
7、离心，15000rpm，4℃，30min。取离心上清，量其体积，测定蛋白浓度。
8、将离心上清装入透析袋，4℃搅拌在pH8.5 20mmol/L Tris-HCl ,1mmol/L EDTA溶液中透析。
四、注意事项
1、加入硫酸铵不论是固体硫酸铵，还是加入饱和硫酸铵溶液，加入时应边加入边搅拌。
2、加入硫酸铵要慢，因为太快会引起蛋白质发生共沉淀，加入固体硫酸铵时事先要将硫酸铵研磨成粉末，加入饱和硫酸铵溶液时要一滴一滴地加入。
3、搅拌要慢，搅拌剧烈，蛋白质溶液容易起泡沫，由于表面张力效应会引起蛋白质变性。

9. 常用的蛋白质分离纯化方法有哪几种各自的作用原理是什么

常用的蛋白质纯化方法有离子交换色谱、亲和色谱、电泳、疏水色谱等等

1. 离子交换色谱：蛋白质和氨基酸一样会两性解离，所带电荷决定于溶液pH。pH小于pI时蛋白质带正电，pH大于pI时蛋白质带负电。不同蛋白质等电点的蛋白质在同一个溶液中，表面电荷情况不同。离子交换就是利用不同蛋白质在同一溶液中表面电荷的差异来实现分离的。

2. 亲和色谱：生物大分子有一个特性，某些分子或基因对它们有特异性很强的吸附作用。如镍柱中Ni可以与His标签的蛋白结合，这种只针对一种或一类物质的吸附就是亲和色谱的原理。

3. 电泳：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，SDS能断裂分子内和分子间氢键，破坏蛋白质的二级和三级结构，强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂，蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中， 与SDS分子按比例结合，形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物，这种复合物由于结合大量的SDS，使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异，由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的，因此在进行电泳时，蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小。

4. 疏水色谱：疏水色谱基于蛋白质表面的疏水区与介质疏水配体间的相互作用，在高浓度盐作用下，蛋白质的疏水区表面上有序排列的水分子通过盐离子的破坏被释放，裸露的疏水区与疏水配体相互作用而被吸附。疏水色谱就是利用样品中各组分在色谱填料上配基相互作用的差异，在洗脱时各组分移动速度不同而达到分离的目的。随着盐离子浓度的降低，疏水作用降低，蛋白质的水化层又形成，蛋白质被解吸附。