微波蒸馏法
① pcr反应正确过程
本文介绍了 PCR 的详细操作流程，强调了实验中的注意事项，列举了常用缓冲液的配方。帮助我们在理解实验的基础上更顺利的操作。
聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）是体外合成双链 DNA 的一种方法，其原理类似于天然 DNA的复制过程，其特异性主要依赖于与其目的片段两端互补的特异引物和高特异性的酶（热启动酶） 。典型的 PCR反应有三个步骤：变性，退火，延伸，经过多次循环反应，获得目的片段。
一．试剂准备
1.DNA 模板
2.特异性引物
3.dNTP Mix
4.PCR buffer
5.热启动酶
二．操作步骤
1.配置反应体系
将各成分依次加入到 0.5ml 的离心管中
扩增使用热启动酶，可在常温下操作，非热启动型的酶要在低温配置反应体系。
2.按照试剂盒说明书设置反应时间和温度，扩增结束后电泳鉴定
3.琼脂糖核酸电泳
· 将电泳所用器具蒸馏水洗净，架好梳子
· 根据要分离的 DNA 片段大小制备合适浓度的琼脂糖凝胶，准确称取一定的琼脂糖加入到锥形瓶中，加入 30ml 左右的电泳缓冲液（TAE 或 TBE）
· 在微波炉中加热融化后冷却至 40℃左右，充分混匀后倒入电泳槽中
· 室温下凝固 40 分钟左右，小心拔出梳子，将凝胶放置电泳槽中准备点样
· 在电泳槽中加入电泳缓冲液，漫过凝胶表面即可，点样孔内不要有气泡
· 样品点样前准备好，（在八连管中）加入 5ul 样品，1ul 的 6xLoding buffer 和 1ul 的染料混合，用抢将混合后的样品缓缓注入到点样孔中，注意不要串孔
· 按照正负极（红正黑负），接通电源，电压 40-60V，时间 30-40min，可根据溴酚蓝的位置判断是否终止电泳
· 电泳结束，关闭电源，凝胶成像观察，并对比 marker 确定片段大小
不同的琼脂糖浓度分离不同大小的 DNA 片段：
三．注意事项
引物
引物是决定 PCR 反应成败的关键，要保证扩增的准确、高效，引物的设计要遵循如下原则：
1. 引物的设计在 cDNA 的保守区域，在 NCBI 上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析的软件，得到不同基因相同的序列就是该基因的保守区
2. 引物的长度：15-28bp，长度大于 38bp，会使退火温度升高，不利于普通 Taq 酶的扩增
② 为什么蒸馏水放到微波炉里加热超过100度时不沸腾
因为它受热均匀，各处温度相同，不发生热的传递，因此不沸腾。同时你可以知道水为什么会沸腾。
PS:这里的沸腾并不是物理学里面的水达到沸点，而是水的上下翻滚